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    15．研究人员将抗盐基因转入普通烟草培育出抗盐烟草，该过程所用的质粒与含抗盐基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示．限制性核酸内切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT．图3表示该过程中利用含目的基因的农杆菌进行转化作用的示意图．请回答下列问题．

     （1）图1质粒中没有标注出来的基本结构是复制原点．
    （2）用图中质粒和目的基因构建基因表达载体时，应选用限制酶BamHI切割质粒，选用Sau3AI（或BamHI、Sau3AI）限制酶切割含目的基因的DNA片段．限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键．
    （3）将上述切开的质粒与目的基因混合，加入DNA连接酶连接后，导入受体受体细胞，受体细胞的类型（对两种抗生素表现出抗性R或敏感性S）包含①②④（不考虑基因突变）．
    ①XR、YR      ②XR、YS       ③XS、YR      ④XS、YS
    （4）图3过程①（填序号）中发生了基因重组，过程②、③所用的培养基中，通常要调控好生长素和细胞分裂素两类激素的比例．
    （5）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是用一定浓度盐水浇灌转基因幼苗或将其移栽到盐碱地中观察其生长状态．

    分析 基因工程技术的基本步骤：
    1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

    解答 解：（1）质粒作为运载体，需要具有标记基因、限制酶切割位点、启动子和终止子等，图中没有显示复制原点．
    （2）目的基因应位于启动子和终止子之间，根据图中箭头可知，目的基因应该在右侧的限制酶切割位点插入，为了防止目的基因和运载体的定向连接，不采用同种限制酶，即不用图中的HindⅢ，破坏Y抗生素基因更加有利于目的基因的检测与鉴定，因此应选用限制酶BamHI切割质粒，选用Sau3AI（或BamHI、Sau3AI）限制酶切割含目的基因的DNA片段．限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键．
    （3）由于将上述切开的质粒与目的基因混合，加入DNA连接酶连接后，可能产生三种结果：普通质粒、重组质粒、目的基因自身环化结构，因此导入受体受体细胞，导入普通质粒的将表现为①XR、YR；导入重组质粒的将表现为②XR、YS；导入目的基因环化结构的将表现为④XS、YS．
    （4）图3过程①表示农杆菌转化法，该过程中农杆菌中的T-DNA整合到烟草细胞的染色体上，发生了基因重组，过程②、③所用的培养基中，通常要调控好生长素和细胞分裂素两类激素的比例．
    （5）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是用一定浓度盐水浇灌转基因幼苗或将其移栽到盐碱地中观察其生长状态．
    故答案为：
    （1）复制原点
    （2）BamHISau3AI（或BamHI、Sau3AI）磷酸二酯
    （3）①②④
    （4）①生长素和细胞分裂素
    （5）用一定浓度盐水浇灌转基因幼苗或将其移栽到盐碱地中观察其生长状态

    点评 本题以“抗盐烟草”为题材，考查基因工程和植物细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，识记植物组织培养的原理及应用，能结合题中信息准确答题．

    练习册系列答案
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