Question

下图是将人的生长激素基因导人细菌细胞B制造工程菌的示意图。已知细菌细胞B不含质粒A，也不含质粒A上的基因。质粒A导人细菌细胞B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题

（1）目的基因可通过PCR技术获取，这一技术中需要的酶是              。

（2）将目的基因与质粒结合形成重组质粒的过程中，需要的工具酶有          。

（3）若要检测目的基因是否导人，可在培养细菌B的培养基中加入         （氨卞青霉素／四环素），若在培养基上观察到大量细菌B的菌落，表明目的基因已成功导  人细菌B，此时所用的培养基属于            培养基（按用途分）。

（4）若要比较准确地了解转化率，一般可通过统计菌落的数目来推测活菌数目，还可以通过         的方法统计活菌数目；前者统计的活菌数目比实际的数目       （多／少／一样），原因是         。为了保证统计数目的准确，还应该设计         。

Answer 1

（1）耐高温的DNA聚合酶

（2）防制性核酸内切酶、DNA连接酶

（3）四环素  选择

（4）显微镜直接计数  少  当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落  对照实验

解析:

考查基因工程的操作方法、过程的识图分析与有关实验操作的设计评价。（1）基因工程中，获取目的基因的方法有从基因文库中获得、从部分基因文库中获得、人工合成法以及用PCR技术扩增目的基因，在PCR技术扩增目的基因是在生物体外的高温环境下进行的，所以必须耐高温的DNA聚合酶；

（2）将目的基因与质粒结合构建重组质粒时，必须用相同的限制酶切割目的基因和质粒以获得相同的粘性末端，同时还必须借助于DNA连接酶，将二者黏合；

（3）由于目的基因的导入，使四环素的抗性基因破坏，因此，重组质粒不在具有康四环素的性状表达，只有康氨苄青霉素的性状作为标记性状，加入氨苄青霉素的培养基具有选择作用，因此属于选择性培养基；

（4）除应用活菌落计数外，还可借助血细胞计数板用显微镜直接计数，活细胞计数法获得的细菌数目比显微镜直接计数法获得数目少，因为显微镜下计数的的细菌数目既有活细菌、又有死细菌，因此，为保证计数准确，必须设置对照试验，以减少实验误差。