Question

【题目】凝乳酶是干酪和干酪素生产过程中的关键酶，动植物及微生物均能产生。由于微生物资源丰富、生长周期短，受气候等因素限制小等特点，微生物凝乳酶成为研究热点。为获得凝乳酶高产菌株，科研人员进行了以下分离、筛选、鉴定工作。

培养基配方表：

（1）从作用上看，该培养基属于______________（填“选择”或“鉴别”）培养基。

（2）科研人员将牧区采集的土壤样品放入无菌水中，振荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行______________，用________________法接种于上述培养基上。接种后的培养基以______________状态放入培养箱。

（3）在涂布接种前，科研人员随机取若干灭菌后的空白平板先进行培养了一段时间，这样做的目的是_____________________________________。

（4）在稀释倍数为106倍下涂布了三个平板（每次取0.1mL），统计菌落数分别为240、250、260，则稀释前1mL菌液中所含此菌数量为_________________。

（5）挑选菌落时以白色沉淀圈大且透明圈小者为佳。将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的_____________（填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的凝乳酶。将一定量的粗提凝乳酶与适量酪蛋白溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将__________与等量酪蛋白溶液混合，作为实验的对照。

Answer 1

【答案】选择 梯度稀释 （稀释）涂布平板 倒置 检测培养基平板灭菌是否合格 2.5×109 上清液 等量失活的粗提凝乳酶

【解析】

酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质。牛奶的蛋白质，主要以酪蛋白为主，人奶以白蛋白为主。酪蛋白是一种大型、坚硬、致密、极困难消化分解的凝乳。哺乳动物胃液中有凝乳酶，能使乳中蛋白质凝聚成乳酪，乳酪易为各种蛋白酶所消化。凝乳酶是生产干酪不可缺少的制剂，微生物因其具有生长周期短，产量高，受时间、空间限制小，生产成本低，提取方便，经济效益高等优点，是目前凝乳酶来源最有前途的发展方向。

（1）由于实验目的是获得凝乳酶高产菌株，凝乳酶能使乳中酪蛋白凝聚成乳酪，所以培养基中需要加入酪蛋白，从作用上看该培养基属于选择培养基。

（2）为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行梯度稀释，并用涂布平板法接种于固体培养基上。为防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染，接种后的培养基应以倒置状态放入培养箱。

（3）在涂布接种前，取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，其目的是检验培养基平板灭菌是否合格。

（4）三个平板菌落的平均数为（240+250+260）÷3=250，稀释倍数为106，每次取0.1mL，所以稀释前1mL菌液中所含细菌数为250÷0.1×106=2.5×109个。

（5）挑选菌落时凝乳效果较好的为白色沉淀圈大且透明圈小的。将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的上清液获得粗提的凝乳酶。将一定量的粗提凝乳酶与适量酪蛋白溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时，需将等量失活的粗提凝乳酶与等量酪蛋白溶液混合，作为实验的对照。