Question

【题目】癌胚抗原（CEA）是某些癌细胞表面产生的一种糖蛋白，临床上通过制备CEA的单克隆抗体来诊断癌症。回答下列问题。

(1)一般不直接用单个的B淋巴细胞培养形成细胞群的办法来生产单克隆抗体。原因是____________。

(2)制备CEA的单克隆抗体时，给小鼠注射的CEA相当于_______，能使小鼠产生免疫反应。

(3)杂交瘤细胞的扩大培养，既可在体外培养，也可注射到小鼠_______内培养。体内培养与体外培养相比，其优点是____________________________________________________。

(4)已知小鼠正常细胞中合成DNA有D和S两种途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。而小鼠骨髓瘤细胞中没有S途径，只有D途径。将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得融合细胞（一般只考虑细胞两两融合），经过多次筛选后生产单克隆抗体。请回答：

①试管中除融合的杂种细胞外，还有______种融合细胞。

②某同学设计了一种方法，尝试从培养液中分离出杂种细胞。

方法：用______________的培养液培养融合细胞，收集能增殖的细胞。

原理：_______________________

Answer 1

【答案】B淋巴细胞不能无限增殖 抗原 腹腔/腹水 无需提供营养丰富的细胞培养液以及严格的无菌环境，操作简便 2 添加氨基嘌呤 B淋巴细胞两两融合的细胞不能分裂增殖。在添加氨基嘌呤的培养液中，DNA合成的D途径被阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞两两融合的细胞不能增殖；淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖

【解析】

单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原，使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养，最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

(1)因为B淋巴细胞不能无限增殖，因此一般不直接用单个的B淋巴细胞培养成细胞群。

(2)根据题意可知，制备CEA的单克隆抗体时，给小鼠注射的CEA相当于抗原，能使小鼠产生免疫反应。

(3)杂交瘤细胞的扩大培养，既可在体外培养，也可体内培养，即注射到小鼠腹腔内培养。体内培养与体外培养相比，其优点是无需提供营养物质以及无菌环境，操作简单。

(4)①骨髓瘤细胞和B淋巴细胞两两融合形成3种融合细胞，即B淋巴细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞、杂交瘤细胞。因此，试管中除融合的杂种细胞外，还有2种融合细胞。

②从培养液中分离出杂种细胞，分析回答：

方法：在培养液中加入氨基蝶呤，再收集增殖的细胞。

原理：B淋巴细胞两两融合的细胞不能分裂增殖。在添加氨基嘌呤的培养液中，DNA合成的D途径被阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞两两融合的细胞不能增殖；淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。