Question

【题目】红细胞内含有大量血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：

(1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步：________、粗分离、纯化和________。

(2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行处理、离心后，收集血红蛋白溶液。

以上所述的过程即是样品处理，它包括红细胞的洗涤、____________________、____________________。

(3)收集的血红蛋白溶液要进行粗分离，其方法是________。然后通过________将样品进一步纯化，最后经________进行纯度鉴定。

(4)下图是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入和洗脱示意图。请据图回答下列问题。

①在加样品示意图中，正确的顺序是___________________。

②用吸管加样品时，应注意正确操作，分别是______________、______________、________________。

③待________________时，才加入缓冲溶液。

④待________接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每________mL收集一管，连续收集。

Answer 1

【答案】 样品处理 纯度鉴定 血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液 透析 凝胶色谱法 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 ④→①→②→③ 不能破坏凝胶面 贴着管壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动 样品完全进入凝胶层 红色的蛋白质 5

【解析】试题分析：血红蛋白的提取和分离一般可分为四步：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定；样品处理包括四个步骤，即红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液和透析；透析袋是利用半透膜制作的，半透膜可以让小分子可以自由进出，而大分子不能通过；样品纯化的目的是通过凝胶色谱法将相对分子质量大的蛋白质除去。

（1）血红蛋白的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。

（2）样品处理包括红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液和透析四步。

（3）收集的血红蛋白溶液要通过透析的方法进行粗分离；样品的纯化是通过胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，最后经SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳进行纯度鉴定。

（4）①加样和洗脱的具体过程为:调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质,因此正确的加样顺序是④→①→②→③。

②用吸管加样时,应注意的正确操作分别是: 使吸管管口沿管壁环绕移动；贴着管壁加样；不要破坏凝胶面。

③待样品完全进入凝胶层时，才加入缓冲溶液。

④待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。