Question

【题目】如图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

（1）构建表达载体需要的酶是：____________，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、________、__________、终止子和复制原点等。

（2）图中载体上的Neo基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是一种抗生素（对细胞有毒害作用），添加G418的目的是_______________。

（3）图中所用的胚胎干细胞来自_______________。

（4）图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的________位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是________。

（5）可以使用________方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。

Answer 1

【答案】（8分，每空1分）

（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶 标记基因 启动子

（2）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞

（3）早期胚胎或原始性腺

（4）内细胞团 同期发情处理

（5）抗原—抗体杂交

【解析】（1）构建表达载体时，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒；表达载体包含目的基因（绿色荧光蛋白基因Gfp）、标记基因、启动子、终止子和复制原点等。

（2）步骤③所用的G418是一种抗生素，其作用是筛选出导入目的基因的胚胎干细胞。

（3）胚胎干细胞来自于早期胚胎或原始性腺。

（4）囊胚包括滋养层细胞和内细胞团细胞，其中滋养层细胞将发育成胎盘和胎膜，而内细胞团细胞将发育成各种组织，因此图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的内细胞团位置；图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是同期发情处理。

（5）从分子水平上检测小鼠是否存在绿色荧光蛋白，可采用抗原-抗体杂交法。