Question

【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答下列有关问题：

（1）过程②利用的技术是______________，过程③中涉及到了基因工程技术，其中作为受体细胞的是____________。

（2）过程③中获取的目的基因是_______________，可以根据该基因的___________________设计引物，利用PCR技术扩增目的基因片段。按此方法和图示技术流程，完成基Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有____________和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等。

（3）图中造血干细胞中的遗传物质至少有___________个来源。为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用____________进行杂交实验。图中所述克隆技术属于___________克隆。

Answer 1

【答案】 早期胚胎培养 ES细胞 (正常的）Rag2基因 脱氧核苷酸序列(或碱基对序列或遗传信息） 限制性核酸内切酶、DNA连接酶和胰蛋白酶 三 抗Rag2蛋白的抗体 治疗性(或体细胞核移植等）

【解析】分析题图：图示是利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗的过程图解，其中①表示核移植过程，②表示早期胚胎培养过程，③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞。

（1）结合前面的分析可知，过程②利用的技术是早期胚胎培养，过程③中涉及到了基因工程技术，其中作为受体细胞的是ES细胞。

（2）图示利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，可推知过程③中获取的目的基因是（正常的）Rag2基因。步骤③中，在构建含有Rag2基因的表达载体时，可以根据Rag2基因的脱氧核苷酸序列设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。分离、培养ES细胞过程中需要用胰蛋白酶分散细胞。PCR技术扩增过程中用耐高温的DNA聚合酶（Taq酶），基因导入过程中需要用限制性酶核酸内切酶和DNA连接酶。

（3）图中造血干细胞中的遗传物质至少有3个来源：上皮细胞的核基因、卵母细胞的质基因和Rag2基因。为检测Rag2基因的表达情况，可采用抗原-抗体杂交法，即提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质（抗原），用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。根据图形分析可知：基因导入在体外进行的，因此，该治疗方式属于体外基因治疗，图中所述克隆技术也属于治疗性克隆。