Question

根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒，回答以下问题：（已知EcoRI酶识别序列为GAATTC，识别位点为G||A）

（1）绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列为：      

……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……     

……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……

红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列为：

  ……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……      

……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……      

其中，           DNA分子含有“目的基因”，            DNA分子是“质粒”。

（2）用剪刀代表进行切割。酶切位点在         （a处还是b处），此化学键称为              。

（3）请用“||”在甲、乙两DNA分子上标出EcoRI的作用位点。

    

（4）从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的                         的群体。按照其中所含基因的量又可分为               文库和              文库。

（5）基因表达载体的构建是基因工程的关键步骤之一，请根据所给的条件完成下列问题：

     已知有4种限制性核酸内切酶，其中1号和4号切割DNA后产生的是平末端，2和3号酶产生的是黏性末端。含目的基因的DNA片段和质粒的酶切序列如下图所示：

 

 

① 请设计酶切方案，构建最佳基因表达载体（重组质粒）                                                                     。

②该重组质粒上有几个复制原点：    ，能用PCR技术扩增吗      （能或不能）

③若用酶2和3切割重组质粒，可以得到几个DNA片段：         。

  若用酶2和1切割重组质粒，可以得到几个DNA片段：         。

Answer 1

（1）乙，   甲．  

（2）a处，     磷酸二酯键

（3） 绿色硬纸板（DNA分子甲）的碱基序列为：（2分）

 ……ATAGCATGCTATCCATG|| AATTCGGCATAC……

  ……TATCGTACGATAGGTACTTAA||GCCGTATG……

红色硬纸纸（DNA分子乙）的碱基序列为：

  ……TCCTAG||AATTCTCGGTATG||AATTCCATAC……

  ……AGGATCTTAA||GAGCCATACTTAA||GGTATG……

   （4）受体菌     基因组       部分基因

   （5) ①目的基因：用酶2和4切割，质粒用酶1和2切割，由于1和4切出的是平末端，可以相连，因而目的基因可以与质粒重组。

②一个   不能

③2个   1个