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CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7 mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3 mol/L的NaCl溶液)时,CTAB-核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70%酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:

①在50 mL离心管中加入20 mL的CTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4 mol/L的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;

②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入上述离心管中,于65℃水浴中保温30 min;

③取出离心管,冷却至室温,加入20 mL的氯仿,轻轻混匀20 min;

④在室温下以12000 r/min的转速离心10~20 min;

⑤将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB-核酸的复合物沉淀;

⑥将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1~2次;

⑦吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在核酸紫外检测仪上观察。

请回答下列问题:

(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,植物细胞匀浆中含有的多种酶会对DNA的提取产生不利影响。用液氮速冻,材料在研磨时易破碎,同时还具有_______________________________。

(2)实验步骤③、④的目的是________________________________。

(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是________,琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、________,使带电分子产生________而实现分离。DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪可以进行________。

 

(1)降低细胞匀浆中酶的活性,避免对DNA的提取产生不利的影响

(2)去除溶液中的蛋白质(使蛋白质变性和沉淀)

(3)NaCl溶液的浓度<0.3 mol/L,CTAB-核酸的复合物因溶解度降低而沉淀

(4)二苯胺 分子大小 形状的不同 不同的迁移速度 DNA含量的测定(或检测DNA)

 

练习册系列答案
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科目:高中生物 来源:2010年江苏省清江中学高二第二学期期末考试生物试卷 题型:综合题

(9分)CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3mol/L的 NaCl溶液),CTAB - 核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70% 酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:
①在50ml离心管中加入20mlCTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4mol/L 的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;
②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入上述离心管中,于65℃水浴中保温30min;
③取出离心管中,冷却至室温,加入20mL的氯仿,轻轻混匀20min;
④在室温下以 12000r/min的转速离心10-20 min;
⑤将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB - 核酸的复合物沉淀; 
⑥将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1-2次;
⑦吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在
核酸紫外检测仪上观察。
请回答下列问题:
(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,
植物细胞匀浆含有多种酶类对DNA的提取产生不利的影响。用液氮速冻,材料在研磨时易于破碎,同时还具有       的作用。
(2)实验步骤③、④的目的是       
(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是      
(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是          。琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及               ,使带电分子产生         
而实现分离。DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪可以进行    

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科目:高中生物 来源:2010届江苏省苏锡常镇四市高三教学情况调查(二)生物试题 题型:综合题

(8分)CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3mol/L的 NaCl溶液),CTAB - 核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70% 酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:
① 在50ml离心管中加入20mlCTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4mol/L 的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;
②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入上述离心管中,于65℃水浴中保温30min;
③ 取出离心管中,冷却至室温,加入20mL的氯仿,轻轻混匀20min;
④ 在室温下以 12000r/min的转速离心10-20 min;
⑤ 将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,
小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB - 核酸的复合物沉淀;
⑥ 将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1-2次;
⑦ 吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在核酸紫外检测仪上观察。
请回答下列问题:
(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,植物细胞匀浆含有多种酶类对DNA的提取产生不利的影响。用液氮速冻,材料在研磨时易于破碎,同时还具有________________________________的作用。
(2)实验步骤③ 、④的目的是____________________。
(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是________________________________________。
(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是_____。琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及__________、__________,使带电分子产生__________而实现分离。DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪可以进行__________。

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(9分)CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3mol/L的 NaCl溶液),CTAB - 核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70% 酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:

①在50ml离心管中加入20mlCTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4mol/L 的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;

②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入上述离心管中,于65℃水浴中保温30min;

③取出离心管中,冷却至室温,加入20mL的氯仿,轻轻混匀20min;

④在室温下以 12000r/min的转速离心10-20 min;

⑤将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB - 核酸的复合物沉淀; 

⑥将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1-2次;

⑦吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在

核酸紫外检测仪上观察。

请回答下列问题:

(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,

植物细胞匀浆含有多种酶类对DNA的提取产生不利的影响。用液氮速冻,材料在研磨时易于破碎,同时还具有        的作用。

(2)实验步骤③ 、④的目的是       

(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是       

(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是           。琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及                 ,使带电分子产生         

而实现分离。DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪可以进行    

 

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(8分)CTAB法是一种从高等真核生物细胞中制备基因组DNA(总DNA)的技术。CTAB能跟核酸形成复合物,在高盐溶液(>0.7mol/L的NaCl溶液)中可溶并且稳定存在,当降低溶液中盐的浓度(<0.3mol/L的NaCl溶液),CTAB - 核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀,再用70% 酒精浸泡可洗脱掉CTAB;氯仿能使蛋白质发生变性而沉淀。提取和检测水稻基因组DNA的操作步骤如下:

① 在50ml离心管中加入20mlCTAB抽提缓冲液(主要成分是1.4mol/L 的NaCl、2%的CTAB),于65℃水浴中预热;

②将20 g新鲜的水稻幼嫩叶片剪成小段后放于研钵中,用液氮速冻并研磨成粉末,加入上述离心管中,于65℃水浴中保温30min;

③ 取出离心管中,冷却至室温,加入20mL的氯仿,轻轻混匀20min;

④ 在室温下以 12000r/min的转速离心10-20 min;

⑤ 将上清液移入另一个离心管中,加入2/3体积的经冷却的异丙醇,用玻璃棒轻轻搅动,

小心取出聚集于玻璃棒上的CTAB - 核酸的复合物沉淀;

⑥ 将沉淀移入另一个离心管中,加入70%乙醇洗涤,重复洗涤1-2次;

⑦ 吹干乙醇后,将DNA溶于适量的TE缓冲液中,在0.8%的琼脂糖凝胶上电泳分离并在核酸紫外检测仪上观察。

请回答下列问题:

(1)植物基因组DNA(总DNA)的提取通常采用机械研磨的方法,常温下研磨时,植物细胞匀浆含有多种酶类对DNA的提取产生不利的影响。用液氮速冻,材料在研磨时易于破碎,同时还具有________________________________的作用。

(2)实验步骤③ 、④的目的是____________________。

(3)实验步骤⑤中,玻璃棒上出现沉淀的主要原因是________________________________________。

(4)对DNA进行定性检测常用的试剂是_____。琼脂糖凝胶电泳是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及__________、__________,使带电分子产生__________而实现分离。DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,利用核酸紫外检测仪可以进行__________。

 

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