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    11．GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：

    （1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是使细胞分散开．
    （2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的XhoⅠ限制酶进行酶切．
    （3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示．图中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的．
    （4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的抗体与提取的蛋白质杂交．当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行传代培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验．

    分析 1、基因工程技术的基本步骤：
    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
    2、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．

    解答 解：（1）动物细胞培养时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶作用，使细胞分散开．
    （2）质粒上有XhoⅠ识别位点，而且在启动子之后，所以选用XhoⅠ限制酶进行酶切．
    （3）泳道①仅有一种条带，属于载体自连；泳道②有两种条带，且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同，为正向连接；泳道③有两种条带，长度与BamHⅠ酶切后结果相同，为反向连接．
    （4）检测基因是否表达采用抗原抗体杂交法．培养动物细胞采用动物细胞培养法，当细胞密度达到一定程度，需要进行分瓶，进行传代培养．
    故答案为：
    （1）使细胞分散开   
    （2）XhoⅠ
    （3）②
    （4）抗体   传代

    点评 本题考查基因工程、动物细胞培养的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤等，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确判断各选项．

    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    1．果蝇的红眼对白眼为显性，控制该性状的基因（用B、b表示）位于X染色体上；灰身对黑身为显性，控制该性状的基因（用W、w表示）位于常染色体上．现有一向眼灰身雌果蝇与一红眼黑身雄果蝇杂交，子一代雌雄果蝇全部表现为灰身，但子一代出现了一只红眼雄果蝇．下列有关说法不正确的是（　　）
    A．若子一代红眼雄果蝇的性染色体组成为XY，则子一代红眼雄果蝇出现的原因最可能是卵细胞形成过程发生了基因突变
    B．若子一代红眼雄果蝇的性染色体组成为XXY，则子一代红眼雄果蝇出现的原因最可能是初级精母细胞减数分裂异常
    C．若让子一代果蝇随机交配后淘汰F2中的全部黑身果蝇，则剩余的全部F2中的果蝇组成的种群中W的基因频率为100%
    D．若让子一代果蝇随机交配，F2中出现红眼灰身雌果蝇、白眼黑身雄果蝇等非亲本类型的原因是基因重组

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    2．图示一个能够自我维持稳态的生态系统所需的条件，则X最可能代表（　　）
    A．生物因素B．共生关系C．能量流动D．物质循环

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    19．向5支试管分别加入2mL 0.5mol/L的过氧化氢溶液，进行如下实验（土豆含有过氧化氢酶），据此判断，下列说法正确的是（　　）
    试管编号12345
    加人物质1mL唾液锈铁钉生土豆块熟土豆块生土豆块和稀盐酸
    实验结果几乎无气泡少量气泡大量气泡几乎无气泡少量气泡
    A．能说明酶具有专一性的是1号试管和3号试管的实验
    B．能说明酶具有高效性的是3号试管和4号试管的实验
    C．2号和5号试管的实验说明生物催化剂和化学催化剂具有同等的催化效率
    D．5号试管的实验说明酶的催化效率不受溶液酸碱度的影响

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    6．在细胞周期中，要辨认染色体的形态和数目，应选择（　　）
    A．间期B．前期C．中期D．后期

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    16．精子与卵细胞通过受精作用形成受精卵这一过程体现出细胞膜的哪一项功能（　　）
    A．控制物质进出细胞B．将细胞与外界环境分隔开
    C．具有选择透过性D．进行细胞间的信息交流

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    2．如图表示一个生物群落中甲、乙两个种群的增长速率随着时间变化的曲线，下列叙述中正确的是（　　）
    A．甲、乙两种群可能为竞争关系，竞争强度弱→强→弱
    B．t2～t3时间段内甲种群出生率小于死亡率，乙种群出生率大于死亡率
    C．tl～t2时间段内甲、乙种群都呈“J”型增长
    D．t4时，甲的种群密度最小，乙的种群密度最大

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    17．嵌合性指的是遗传组成不同的细胞在同一个有机体中同时存在的现象．在用秋水仙素进行多倍体育种过程中，由于细胞分裂的不同步，可能在一个个体中同时出现多种染色体倍性细胞，我们称之为嵌合体．不同细胞中染色体加倍情况可能存在：未加倍、加倍一次、加倍两次、甚至是加倍三次等．
    豌豆（二倍体，体细胞染色体倍性为二倍）的叶表面有毛（A）对无毛（a）是完全显性，现对一株基因型为Aa的豌豆幼苗进行秋水仙素处理（只考虑二倍与四倍），花内细胞染色体倍性可能有三种情况：
    情况一：同一朵花内细胞均为二倍；
    情况二：同一朵花内细胞均为四倍；
    情况三：同一朵花内细胞既有二倍也有四倍．（且大孢子母细胞（等同于卵原细胞）与小孢子母细胞（等同于精原细胞）分别属于不同倍性）
    （1）若大孢子母细胞是二倍性细胞，小孢子母细胞是四倍性细胞，则它们产生的配子基因型及比例分别是：A：a=1：1，AA：Aa：aa=1：4：1．
    （2）现将该豌豆每个果实内的种子单独种植，根据后代的表现型比例来判断其染色体的倍性
    若有毛：无毛=3：1，则为情况一，后代为二倍体；
    若有毛：无毛=35：1，则为情况二，后代为四倍体；
    若有毛：无毛=11：1，则为情况三，后代为三倍体；
    （3）为了避免嵌合体的产生，除了用一定的技术手段使细胞分裂同步外，我们还可以用秋水仙素对该豌豆的单个细胞进行处理，然后通过植物组织培养技术获得豌豆植株．

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    18．下列各项中会引起血浆中抗利尿激素分泌减少的是（　　）
    A．大量饮水B．炎热比寒冷环境下
    C．食用过咸的菜肴D．细胞中K+浓度增加

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