Question

【题目】人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值。下图是以基因工程技术获取HSA的两条途径，其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。回答下列问题。

（1）基因工程中可通过PCR技术扩增目的基因。生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是___________；在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是___________上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA分子双链间的___________。

（2）已知碱性磷酸酶能除去核苷酸末端的5磷酸，构建表达载体的过程中用该酶处理Ti质粒，但HSA基因不用碱性磷酸酶处理，这样做的目的是___________，经过上述处理后的Ti质粒在DNA连接酶的作用下可与HSA基因之间形成___________个磷酸二酯键，再经相关处理获得结构完整的重组DNA分子。

（3）过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养后，还应转接到含___________的培养基上筛选出转化的植物细胞。③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞，采用最多，也是最为有效的方法是___________，还可以使用动物病毒作为载体，实现转化。

（4）为检测HSA基因的表达情况，可提取受体细胞的___________，用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验。

Answer 1

【答案】解旋酶 加热至90~95℃ 氢键 防止Ti质粒发生自身连接 2 无色物质K 显微注射技术 蛋白质

【解析】

由图可知，①表示将目的基因导入植物细胞，②表示植物组织培养，③表示将目的基因导入动物细胞，④需要经过早期胚胎培养及胚胎移植等。

（1）生物体细胞内的DNA复制开始时，在解旋酶的作用下可以解开DNA双链；在体外利用PCR技术扩增目的基因时，加热至90~95℃引起模板DNA解链为单链，上述两个解链过程均破坏了DNA分子双链间的氢键。

（2）为了防止Ti质粒发生自身连接，构建表达载体的过程中用该酶处理Ti质粒，但HSA基因不用碱性磷酸酶处理。目的基因两端的序列均与质粒连接，故在DNA连接酶的作用下可与HSA基因之间形成2个磷酸二酯键，再经相关处理获得结构完整的重组DNA分子。

（3）由于报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色，故过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养后，还应转接到含无色物质K的培养基上筛选出转化的植物细胞。③过程常用显微注射法将目的基因导入绵羊受体细胞，还可以使用动物病毒作为载体，实现转化。

（4）为检测HSA基因的表达情况，看其是否表达出HAS，可提取受体细胞的蛋白质，用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验，看是否出现杂交带。