回答下列有关基因工程的问题如表列出了几种限制酶识别序列及其切割位点.图1.图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．限制酶 BamHⅠ HindⅢ EcoRⅠ SmaⅠ 识别序列及切割位点 (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后.含有个游离的磷酸基团．用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒.不能使用SmaⅠ切割.原因是．(2)与只使用EcoR I相比较.使用BamHⅠ和Hind� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

回答下列有关基因工程的问题
如表列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有

个游离的磷酸基团．用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是

．
（2）与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于

．
（3）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在

的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测．
（4）下列有关限制酶的叙述正确的是

（多选）．
A．从反应类型来看，限制酶催化的是一种水解反应
B．限制酶的活性受温度、pH的影响
C．一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D．限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小
若用限制酶A、B单独或联合切割一个5000bp（bp为碱基对）大小的线状DNA分子，相关实验及数据如表．

	第一步水解	产物（bp）	第二步水解	产物（bp）
实验1	A酶切割	2100	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	200、1900
		1400		600、800
		1000		1000
		500		500
实验2	B酶切割	2500	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	1900、600
		1300		800、500
		1200		1000、200
实验3	A酶、B酶同时切割	1900、1000、800、600、500、200

（5）由单酶剪切的片段数可知，A酶和B酶的酶切位点分别为

个和

个．
（6）综合实验数据的分析，在图3中绘制出实验3的酶切图谱．

．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析题图：图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，在质粒上和含有目的基因的外源DNA分子上都含有四种限制酶的切割位点，但质粒的抗性基因和目的基因中都含有SmaⅠ切割位点．
分析表格：单独用A酶切割可以产生4个DNA片段，所以A酶的酶切位点有3个；单独用B酶切割可以产生3个DNA片段，所以B酶的酶切位点有2个．

解答： 解：（1）图1质粒只含有一个SmaⅠ切割位点，因此经SmaⅠ切割后，形成2个黏性末端，含有2个游离的磷酸基团．
质粒的抗性基因和目的基因中都含有SmaⅠ切割位点，用SmaⅠ切割会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
因此用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割．
（2）与只使用EcoRI相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，也可以防止目的基因和质粒的反向连接．
（3）丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌不能在以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中生长，而导入重组质粒的丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，能在以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中培养，所以可以将受体细胞用以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基培养，完成目的基因表达的初步检测．
（4）A、从反应类型来看，限制酶催化的是一种水解反应，A正确；
B、酶的作用条件温和，其活性受温度、pH的影响，B正确；
C、限制酶具有专一性，一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列，C正确；
D、限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大，D错误．
故选：ABC．
（5）由以上分析可知，该线性DNA分子上含有3个A酶切割位点，含有2个B酶切割位点．
（6）经A酶切割后获得的2100bp片段，再用B酶切割后又产生200bp和1900bp两个片段，则B酶的切割位点如图1；经B酶切割后获得的2500bp片段，再用A酶切割后又产生1900bp和600bp两个片段，则A酶的切割位点如图2．

根据表中数据结合以上分析可知，A酶和B酶的切割位点如下：

故答案为：
（1）2      SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
（2）可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
（3）蔗糖为唯一含碳营养物质
（4）ABC
（5）3     2
（6）

点评：本题结合图表，考查基因工程的原理和技术、酶的特性，要求考生识记基因工程的工具及作用，掌握基因工程的操作步骤，能根据图1和图2中信息选择合理的限制酶；分析表中数据，能准确判断酶A和酶B切割位点的数目及其在DNA分子上的位置．

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