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【题目】科学家通过诱导黑鼠体细胞脱分化获得诱导性多能干细胞(iPS),继而利用iPS细胞培育出克隆鼠。流程如下:

(1)从黑鼠体内获得一部分组织细胞,经过___________消化,使其分散成单个的细胞,然后置于培养液中放入_________________中保温培养。在培养过程中细胞保持生长、分裂直至出现_____________现象,就要进行传代培养。

(2)下列关于动物细胞培养的叙述,正确的是___________(多选)。

A.在10代以内的细胞大多具有正常的二倍体核型

B.某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞

C.细胞克隆的最基本要求是必须来源于单个细胞

D.动物细胞培养液要添加血清等营养物质

(3)图中重组囊胚通过_________技术移入白鼠子宫内继续发育。克隆鼠的遗传物质主要来自图中______鼠。为了提高成功率,代孕母鼠需进行激素处理,使其_____________

【答案】 胰蛋白酶(或胶原蛋白酶) CO2培养箱 接触抑制 ABCD 胚胎移植 同期发情

【解析】试题分析:据图分析,从黑鼠体内获得体细胞后,脱分化形成多能干细胞;从灰鼠体内提取出2-细胞胚胎,经过特殊处理形成囊胚,将多能干细胞移植到囊胚的内细胞团,形成重组胚胎,移植到白鼠子宫,形成克隆鼠。

(1)从黑鼠体内获得组织细胞后,需要用胰蛋白酶处理,才能得到分散的单个细胞然后置于培养液中放入CO2培养箱中保温培养。培养的细胞在贴壁成长至铺满培养皿底时停止分裂,这种现象称为细胞接触抑制

(2)在10代以内的细胞一般遗传物质没有发生改变,具有正常的二倍体核型,A正确;细胞癌变是原癌基因和抑癌基因突变引起的;基因基因突变具有不定向的特点,如果癌细胞在合适的条件下发生基因突变,有可能使突变后的原癌基因或抑癌基因变成正常的基因,使细胞失去癌细胞的特点,B正确。一个克隆是指1个细胞经培养形成的细胞群,多个祖细胞培养成的细胞群不是一个克隆,C正确;动物细胞培养液中为了保证营养全面,通常要在合成培养基的基础上添加血清等营养物质,D正确。

小鼠胚胎干细胞可由囊胚的内细胞团分离培养获得.iPS与ES细胞具有胚胎细胞的特性,体积较小,细胞核大,核仁明显;同样具有发育全能性,有望在对人类iPS细胞进行定向诱导分化后用于疾病的细胞治疗.克隆技术属于无性繁殖,不能丰富生物的多样性,生物没有进化,

(3)图中重组囊胚通过胚胎移植技术移入白鼠子宫内继续发育,暂不移入的胚胎可使用冷冻方法保存克隆鼠的遗传物质主要来自图中提供细胞核的黑鼠。为了提高成功率,代孕母鼠需进行激素处理,使其与供体黑鼠同期发情。

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(1)在上述实验中,为了防止目的基因和pBV220载体在酶切后的末端发生任意连接,酶切时应选用的酶是______________________。目的基因的长度为______pb(重组质粒上目的基因的插入位点与酶切位点之间的碱基对忽略不计)。pBV-IL1-His表达载体除了氨苄青霉素抗性基因(Ampr)、目的基因外还必须具有______________________等基因。

(2)转化感受态大肠杆菌时需要用________处理细胞。利用PCR技术体外扩增DNA时,需将双链DNA加热到90℃以上,目的是___________________________

(3)最后是通过________________技术来检验实验是否成功。假设未检测出目的蛋白,分析可能的原因有______________________________。(写出一种即可)

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