Question

【题目】下图为利用人成纤维细胞（具分裂能力、能在HAT培养基上存活）和小鼠骨髓瘤细胞（具分裂能力、不能在HAT培养基上存活）进行人类基因定位的操作示意图，请回答相关问题。

（1）图示方法是____________________技术的应用，该技术的基础是_____________________技术。

（2）操作所用的成纤维细胞应传代_____代以内，诱导融合时需要加入的促融剂是________________。

（3）人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成多核细胞，再经过一次____________，形成单核细胞。

（4）HAT培养基起__________培养作用，操作中加入鸟本苷的目的是________________________。细胞培养所需的气体条件是95%空气和5%CO2，其中CO2的主要目的是______________；除以上两类条件外，动物细胞体外培养还需要___________和_______两项条件。

（5）表所示为杂交细胞A、B、C中存在的人类染色体及人类特有的4 种酶（“+”表示存在，“-”表示不存在），这4种酶均为单基因编码产生，据表判断，编码________酶的基因位于染色体2上，排列方式呈____________。

Answer 1

【答案】 动物细胞融合 动物细胞培养 10 PEG（或灭活病毒） 有丝分裂 选择 除去成纤维细胞 维持培养液的pH 营养 无菌无毒的环境 m和p 线性

【解析】试题分析：据图分析，成纤维细胞和小鼠骨髓瘤细胞在促融剂的作用下形成三种杂交细胞，即成纤维细胞自身融合细胞、小鼠骨髓瘤细胞自身融合的细胞和杂交细胞；在HAT培养基上筛选出成纤维细胞自身融合细胞和杂交细胞；加人鸟本苷的目的是除去成纤维细胞，留下杂交细胞。杂交细胞A中存在2和3号染色体，表达出酶m和p；杂交细胞B存在1和3号染色体，表达出酶n和q；杂交细胞C中存在1和2号染色体，表达出酶m、n、p和q，说明编码m和p酶的基因位于染色体2上，编码n和q酶的基因位于染色体1上。

（1）据图分析，该技术属于动物细胞融合技术，基础是动物细胞培养。

（2）目前使用的正常细胞通常为10代以内的，可以保持细胞正常的二倍体核型。成纤维细胞应传代10代以内，遗传物质没有发生改变的细胞株，诱导融合时需要加入的促融剂是PEG（或灭活病毒）。

（3）人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成多核细胞，经过一次有丝分裂，形成单核细胞。

（4）据题干信息，人成纤维细胞能在HAT培养基上存活，而小鼠骨髓瘤细胞不能在HAT培养基上存活，则HAT培养基起选择培养作用，筛选出人成纤维细胞和成纤维细胞融合的杂交细胞，操作中加人鸟本苷的目的是除去成纤维细胞，筛选出杂交细胞；动物细胞培养所需的气体条件是95%空气和5%CO2，其中CO2的主要目的是维持培养液的pH；除以上两类条件外，动物细胞体外培养还需要充足的营养和无菌无毒的环境条件。

（5）据表判断，杂交细胞B中不存在2号染色体，酶m和p没有表达，说明编码m和p酶的基因位于染色体2上，排列方式呈线性。