Question

13．Ⅰ．人们日益关注食品安全．一种保鲜剂-青鲜素，能抑制植物细胞生长与分裂，从而抑制发芽，被用于蔬菜和水果的保鲜，但其残留物会损害人体健康，科研人员以小鼠我实验材料，用“动物细胞培养技术”对青鲜素毒性进行了检测
培养前，对所取小鼠组织需用胰蛋白酶（胶原蛋白酶）处理，制成细胞悬液；培养时，需向培养液中通入5%的CO₂，其目的是调节pH；为提供全面的营养，培养液中常常还需要加入动物血清（或血浆）等一些天然成分
检测青鲜素毒性的实验结果如表：

培养瓶编号	1	2	3	4	5	6
青鲜素浓度（mg/L）	0	10	30	90	270	810
变异细胞比例	0	0	$\frac{1}{1{0}^{6}}$	$\frac{1}{1{0}^{6}}$	$\frac{2}{1{0}^{6}}$	$\frac{8}{1{0}^{6}}$

实验结论：低浓度的青鲜素毒性很小，浓度90mg/L以上毒性增加明显
Ⅱ．为验证某种中药牙膏是否像其广告宣传的一样具有较强的抑菌功效，某生物兴趣小组的同学设计了如下实验（符合无菌操作要求），请分析下述实验过程并回答下列问题．
①用无菌水漱口，向漱口液中加入适量的该中药牙膏；
②配制牛肉膏蛋白胨固体培养基；
③将上述样品接种到培养基上，在适宜条件下进行培养；
④一段时间后，对培养结果进行观察并进行菌落计数
（1）制备牛肉青蛋白胨固体培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板；培养基在分装前往往要采用高压蒸汽灭菌法灭菌
（2）本实验样品接种时最好采用稀释涂布平板法．培养一段时间后，培养基表面长出菌落，每一个标准菌落来源于样品中的一个活菌
（3）证明所用培养基已经彻底灭菌的方法是：对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基已彻底灭菌．

Answer 1

分析 1、分析表格，自变量是添加剂中青鲜素浓度，因变量是变异细胞比例，其中第一组是对照组，其它是实验组．
2、培养基在分装前往往要进行高压蒸汽灭菌．接种方法有平板划线法、稀释涂布平板法等，由于此样品用固体培养基接种且培养一段时间后，培养基表面长出菌落，所以接种最好采用稀释涂布平板法；菌落是由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞种群．检测大肠杆菌一般使用伊红-美蓝培养基．实验设计要遵循对照原则和单一变量原则．

解答 解：Ⅰ动物细胞培养时，所取小鼠组织需用胰蛋白酶（胶原蛋白酶）处理，制成细胞悬液；培养时，需向培养液中通入5%的C0₂，其目的是调节pH，为提供全面的营养，培养液中常常还需要加动物血清（或血浆）．
检查青鲜素的毒性，通常用变异细胞占全部正常细胞的百分数作为指标．最后得出结论：浓度在10 mg/L以下没有影响，大于90mg/L毒性增加明显．
Ⅱ（1）培养基在分装前往往要进行高压蒸汽灭菌．
（2）因为此样品用固体培养基接种且培养一段时间后，培养基表面长出菌落，所以接种最好采用稀释涂布平板法；菌落是由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞种群．
（3）证明所用培养某已经彻底灭菌的方法是对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基已彻底灭菌．
故答案为：
Ⅰ胰蛋白酶（胶原蛋白酶）    调节pH     动物血清（或血浆）
结论：低浓度的青鲜素毒性很小，浓度90mg/L以上毒性增加明显
Ⅱ高压蒸汽灭菌
（2）稀释涂布平板　 一个活
（3）对未接种的培养基进行培养，如无菌落出现，则证明培养基已彻底灭菌

点评 本题考查动物细胞培养、微生物培养及实验设计的相关知识，意在考查考生的识记能力和能理解所学知识的要点的能力．