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    低温蛋白酶是海洋嗜冷细菌分泌的酶类，最适温度在20℃左右，作为洗衣粉添加剂可在较低的温度下达到理想的洗涤效果。下图为分离可分泌低温蛋白酶的某种嗜冷菌的操作步骤，据图回答问题：

    （1）分装前，对培养基要进行___   操作。为避免杂菌污染，要及时进行      操作。

    （2）将扩大培养后的深海微生物用         法接种到含酪蛋白的固体培养基表面，在适宜条件下培养一段时间，挑出形成透明圈的单一菌落，即为初选出的嗜冷菌。从嗜冷菌分泌的蛋白质中分离出低温蛋白酶的最常用的方法是____       。

    （3）为进一步检测分离出的嗜冷蛋白酶的最适温度，将该菌按上图所示分5组分别置于     中进行培养，

            组所对应的温度为最适温度。

    （4）为提高酶的利用率，可以采用         技术，常用的方法有            。

     

    【答案】

    （1）调pH    高压蒸汽灭菌

    （2）稀释涂布平板（或平板划线）   电泳法

    （3）恒温箱  透明圈与菌落直径比值最大

    （4）固定化     共价键结合法 （或物理吸附法或包埋法）

    【解析】

    试题分析： （1）培养基在分装之前要先调试pH，然后分装，再灭菌，对培养基进行灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法。（2）培养分离微生物时常用稀释涂布平板法或平板划线法。而分离不同种类蛋白质时常用电泳法。（3）培养的过程需放在恒温箱内进行培养。因为是最适温度下的，所以透明圈与菌落直径比值最大。（4）可通过固定化酶来提高酶的利用率，固定化常用的方法是共价键结合法或物理吸附法或包埋法。

    考点：本题考查微生物的培养和分离、及固定化酶制备等的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。

     

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