Question

【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的________。小鼠体细胞体外培养时，所需气体主要是O2和CO2，其中CO2的作用是维持培养液（基）的______________。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。体外培养条件下，ES细胞在______________细胞上，能够维持只增殖不分化的状态。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的__________设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有______________酶的酶切位点。

（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________，用__________的抗体进行杂交实验。

Answer 1

【答案】细胞核 PH值（或酸碱度） 囊胚 饲养层 核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ 蛋白质 抗Rag2蛋白

【解析】

分析题图：图示是利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗的过程图解，其中①表示核移植过程，②表示早期胚胎培养过程，③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞。

（1）核移植是指将体细胞核移植到去核卵母细胞中，因此①核移植过程中，在核移植前应去除卵母细胞的细胞核；CO2的作用是维持培养液（基）的PH值。

（2）ES细胞可从囊胚期的内细胞团中分离；体外培养时ES细胞在饲养层细胞上培养，可以维持只增殖不分化的状态。

（3）设计引物要遵循碱基互补配对原则，所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计；Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的，所以表达载体应具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位点。

（4）基因表达的产物是蛋白质，故为检测Rag2基因的表达情况，需要提取小鼠骨髓细胞的蛋白质与抗Rag2蛋白的抗体进行杂交。