Question

【题目】骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一。科研人员研究曲古抑菌A（TSA）对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制，为临床治疗寻找新方向。实验过程如下：

步骤1 用含青霉素和链霉素的高糖培养基，在37℃、5% CO2培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间。

步骤2 取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞，用加入不同浓度的TSA（0～200

ng·mL-1）的培养基继续培养24h。

步骤3 对各组细胞进行抽样检测，检测方法是先用台盼蓝试剂（一种细胞活性染料）染色再用血细胞计数板计数，统计细胞存活率（未染色细胞数/细胞总数×100%），结果如图1。

步骤4 分别提取TSA浓度为0 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1处理的3组细胞，测量细胞中与凋亡相关的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌动蛋白基因（不同的组织细胞中表达相对恒定）表达的蛋白质量并计算比值，结果如图2。

分析回答：

（1）与正常成骨细胞相比，骨肉瘤细胞容易在体内分散和转移，其主要原因是 。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是 ，细胞培养箱中保持5% CO2的作用是 。

（2）步骤2中，设置0 ng·mL-1 TSA实验的主要目的是 。

（3）用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是 。

（4）图1所示结果表明 。

（5）根据图2判断，骨肉瘤细胞中 基因过度表达会加速细胞凋亡。

Answer 1

【答案】（1）骨肉瘤细胞膜上的糖蛋白等物质减少 防止杂菌污染 维持培养液pH

（2）排除非测试因素对实验结果的影响

（3）活细胞的细胞膜具有选择透过性，台盼蓝不能进入活细胞内（死细胞膜失去选择透过性，台盼蓝能进入死细胞内）

（4）TSA浓度越高对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用越强

（5）Bax

【解析】

（1）骨肉瘤细胞属于癌细胞，癌细胞细胞膜上的糖蛋白等物质减少，细胞容易在体内分散和转移。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的防止杂菌污染。细胞培养箱中保持5% CO2的作用是维持培养液pH。

（2）0 ng·mL-1 TSA实验组为对照组，排除除试验因素以为非测试因素对实验结果的影响。

（3）活细胞的细胞膜具有选择透过性，台盼蓝不能进入活细胞内，而死细胞膜失去选择透过性，台盼蓝能进入死细胞内，这样，活细胞不会染成颜色，而死细胞会出现蓝色，从而可以统计出细胞死亡个数。

（4）TSA浓度越高，细胞存活率越低，细胞死亡数越多，说明TSA浓度越高对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用越强。

（5）TSA浓度越高，培养液中的Bax蛋白更多， Bax蛋白由Bax基因表达，因此说明骨肉瘤细胞中Bax基因过度表达出Bax蛋白，会加速细胞凋亡。