Question

【题目】如图是利用β﹣乳球蛋白（BLG）基因5′端调控序列和人乳铁蛋白（hLF）基因构建能在羊乳腺细胞特异性表达的运载体的简要流程图，请据图回答下列问题：
（1）②为PCR过程，除了要加入引物、原料外还需要加入 ， 在此过程中引物的作用是 ．
（2）BamH I的识别序列为﹣G↓GATTC﹣，Hind III的识别序列为﹣A↓AGCTT﹣，选用这两种酶进行操作的意义是 ， 除此之外，③过程还需要酶．
（3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为 ．
（4）要获得能表达目的基因的羊，应将重组质粒导入羊的（填“乳腺细胞”或“去核卵细胞”、“受精卵”），获得优良胚胎后，为了提高胚胎的利用率，常采用的方法来处理胚胎．

Answer 1

【答案】
（1）耐高温的DNA聚合酶、模板；使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
（2）避免目的基因和运载体产生的末端任意连接（环化连接）； DNA连接
（3）BLG基因5′端调控序列作为启动子,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动hLF基因转录出mRNA
（4）受精卵；胚胎分割
【解析】解：（1）PCR技术的条件：模板DNA（目的基因）、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），其中引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸．（2）BamH I的识别序列为﹣G↓GATTC﹣，Hind III的识别序列为﹣A↓AGCTT﹣，选用这两种酶进行操作时产生的黏性末端不同，这样可以避免目的基因和运载体产生的末端任意连接（环化连接）；③为基因表达在的构建过程，该过程首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次还需要DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA．（3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为BLG基因5′端调控序列作为启动子，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动hLF基因转录出mRNA．（4）培育转基因动物时，应该以受精作为受体细胞，因为受精卵的全能性最高，且具有促进全能性表达的物质；来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此为了提高胚胎的利用率，常采用胚胎分割的方法来处理胚胎．

所以答案是：（1）耐高温的DNA聚合酶、模板 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 （2）避免目的基因和运载体产生的末端任意连接（环化连接） DNA连接（3）BLG基因5′端调控序列作为启动子，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动hLF基因转录出mRNA （4）受精卵 胚胎分割

【考点精析】利用基因工程的原理及技术对题目进行判断即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重组技术．