Question

【题目】EPO是促红细胞生成素（Erythropoietin）的英文简称，是一种激素样物质，可促进体内新红细胞生成。人类已可通过基因工程合成EPO基因，并采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物。其过程如下：

请回答下列问题：

（1）从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录得到 ，再通过PCR技术获得大量EPO基因。

（2）供体母鼠通常情况下每次排卵8～12枚，为使其超数排卵，需注射 激素以排出更多的卵子，培养到 时期与获能的精子相遇时，精子首先发生 反应，穿越放射冠和透明带，完成体外受精。

（3）①过程构成了基因表达载体，内部包括不可缺少的组成部分，其中 能驱动基因的转录。

（4）采用 技术，将重组表达载体导入小鼠受精卵中，将受精卵移入发育培养液中继续培养。培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加 、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清（血浆）等物质。

（5）当胚胎发育至 时期，向受体移植，为获得更多个转基因胚胎，要将 均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 。

（6）若想检验转基因仓鼠是否成功表达EPO，可以采用 技术对血液来进行检测。

Answer 1

【答案】（1）cDNA

（2）促性腺 减数第二次分裂中期 顶体

（3）启动子

（4）显微注射技术 维生素

（5）桑椹胚或囊胚 内细胞团 性别鉴定

（6）抗原抗体杂交

【解析】

试题分析：（1）可通过反转录法获取目的基因。故从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录可得到控制EPO合成的cDNA，再通过PCR技术获得大量EPO基因。

（2）为使供体母鼠超数排卵，需注射促性腺激素。卵子要培养到减数第二次分裂中期才具有受精能力。减数第二次分裂中期的卵母细胞与获能的精子相遇时，精子首先发生顶体反应，穿越放射冠和透明带，完成体外受精。

（3）基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因和标记基因。其中启动子为RNA聚合酶结合位点，能驱动基因的转录。

（4）将重组表达载体导入动物细胞中常采用显微注射技术。动物细胞培养的培养液成分除一些无机盐和有机盐之外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及动物血清或血浆等物质。

（5）胚胎移植一般选用处于桑椹胚或囊胚时期的胚胎，为获得更多个转基因胚胎，可采用胚胎分割技术，要将囊胚的内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。因需借助转基因仓鼠的卵巢获得产物，故移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定，选择雌性胚胎进行移植。

（6）检测是否合成蛋白质，用抗原—抗体杂交法。故若想检验转基因仓鼠是否成功表达EPO，可以采用抗原—抗体杂交技术对血液来进行检测。