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    8．为了调查邯郸市自来水水源地的水质情况，某研究小组对该地自来水水样中的大肠杆菌进行了测定，请回答下列问题：
    （1）该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌，划线时在培养基上共画了4个区域，则需要5次灼烧接种环．在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
    （2）如果是用试管培养微生物，在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是扩大接种面积．接种时需在酒精灯火焰旁操作的原因是：为避免周围环境中微生物的污染．
    （3）检测自来水中大肠杆菌，可选用伊红美蓝培养基，伊红美蓝培养基从功能上属于鉴别培养基，若其中加入蛋白胨，蛋白胨能提供的主要营养有碳源、氮源和维生素．该研究小组在统计菌落数目时，为防止因培养时间不足而遗漏菌落数，应培养至菌落数目稳定时，再计数．

    分析 1、微生物常见的接种的方法：
    ①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
    ②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
    2、划线分离操作中的有关问题：
    ①在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环．

     第一次灼烧每次划线之前灼烧划线结束灼烧
    目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养基杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染或感染操作者
    ②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种．
    ③在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线．每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落．
    3、培养基按功能分：
    种类制备方法特征用途
    选择培养基培养基中加入某种化学成分根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
    鉴别培养基加入某种试剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

    解答 解：（1）采用平板划线法纯化微生物时，每次划线之前都要灼烧接种环，划线结束后还需灼烧接种环，若划线时在培养基上共画了4个区域，则需要5次灼烧接种环；每次划线前都要灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，这样可以将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
    （2）如果是用试管培养微生物，在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是扩大接种面积．接种时需在酒精灯火焰旁操作，这是为了避免周围环境中微生物的污染．
    （3）伊红美蓝培养基从功能上属于鉴别培养基；培养基中加入的蛋白胨能提供的主要营养有碳源、氮源和维生素．该研究小组在统计菌落数目时，为防止因培养时间不足而遗漏菌落数，应培养至菌落数目稳定时，再计数．
    故答案为：
    （1）5       将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面   
    （2）扩大接种面积         为避免周围环境中微生物的污染
    （3）鉴别       碳源、氮源和维生素   菌落数目稳定

    点评 本题主要考查培养基的制作和微生物的接种方法，意在强化学生对实验室的微生物的培养的相关知识的理解与掌握．

    练习册系列答案
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    18．硝化细菌广泛存在子通气性较好的土壤中，其部分代谢反应如图所示，下列关于硝化细菌的培养条件的描述正确的是（　　）
    A．碳源为葡萄糖B．培养时需隔绝空气
    C．氮源是氮气D．培养时需冷藏

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    19．在含有X-gal和IPTG物质的培养基上，大肠杆菌质粒上的lacZ′基因如表达出产物β-半乳糖苷酶，则能使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色．基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞．请据图回答：
    （1）限制酶EcoRI的识别序列和酶切位点是-G↓，AATTC-，SmaI的识别序列和酶切位点是-CCC↓GGG-，图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是-TTAA．限制酶EcoRI在质粒上的酶切位点在lacZ′基因中，故该基因工程中，lacZ′基因的作用为标记基因．
    （2）获取目的基因后，常利用PCR技术在体外将其大量扩增，此过程需要一种特殊的酶叫Taq酶（或“耐高温的DNA聚合酶”）．
    （3）转化过程中，大肠杆菌应先用Ca2+（或CaCl2溶液）处理，使其成为感受态细胞．
    （4）颜色为白色的是含有目的基因的菌落，原因是lacZ‘标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出β-半乳糖苷酶，故菌落为白色．

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    16．下列关于DNA和蛋白质的有关叙述，正确的是（　　）
    A．DNA的复制和转录与蛋白质无关
    B．同一生物体不同细胞的细胞核中DNA不同，蛋白质也不同
    C．协助扩散过程需载体蛋白的参与
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    A．苯乙酸和α-萘乙酸不都是植物生长调节剂
    B．激素调节只是植物生命活动调节的一部分
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    D．细胞分裂素和脱落酸在对细胞分裂的调节中起拮抗作用

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    （1）在微生物培养过程中，为了防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行灭菌；在倒平板时，应在酒精灯火焰附近进行操作．
    （2）为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是接种环温度过高，细菌均被杀死．
    （3）采用稀释涂布平板法统计硅酸盐细菌活菌的个数，要使得到的估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样本稀释的比例合适．如表是每种培养基上每个稀释度的平均菌落数及菌落直径的情况．
    培养基种类各稀释度对应的平均菌落数菌落直径（mm）
    103104105106
    无氮培养基323201.0～2.0
    钾细菌培养基36640.6多数小于1.5
    硅酸盐细菌培养基50851.2多数大于2.0
    根据表格分析可知，该实验的自变量是培养基的种类及细菌的稀释度．根据实验结果分析，采用硅酸盐细菌培养基筛选硅酸盐细菌的效果最好．对分离的硅酸盐细菌进行计数时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少．
    （4）若在进行上述实验的同时不设置空白对照，则不能确定培养基灭菌是否彻底．

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