[题目]科研人员将荧光素酶基因整合到慢病毒载体.利用载体将荧光素酶基因导入人淋巴瘤细胞.操作过程中含有以下几个过程:(1)利用PCR技术扩增荧光素酶基因片段.首先需要设计两种引物.序列分别为(5'-CAACA·········AAAAC- 3')和(5' -CAAGT·········TCCCC-3').两种引物的� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】科研人员将荧光素酶基因整合到慢病毒载体，利用载体将荧光素酶基因导入人淋巴瘤细胞。操作过程中含有以下几个过程：

（1）利用PCR技术扩增荧光素酶基因片段，首先需要设计两种引物，序列分别为（5'-CAACA·········AAAAC- 3'）和（5' -CAAGT·········TCCCC-3'）。

两种引物的碱基序列分别与_____________互补，且引物必须具有一定长度（如15一30个左右碱基），以确保_______________________。

（2）切割慢病毒载体DNA，用___________酶将其与荧光素酶基因连接，构建出荧光素酶慢病毒重组载体。用重组载体去感染人淋巴瘤细胞，最终获得能稳定表达荧光素酶的淋巴瘤细胞。对获得的淋巴瘤细胞进行培养，培养温度应为_________，需要的气体主要有O2和CO2，其中CO2的作用是__________________。

（3）通过统计细胞数量，比较含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（甲）和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（乙）的生长情况，结果如图（a)，据图可看出这两种细胞生长趋势基本相似，说明________________；再分别取第5、6、7、8、9、10代的含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞，加人荧光素酶底物，检测荧光强度，结果如图（b），说明____________________。

（4）将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠（无胸腺）体内，通过检测_________，可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。

【答案】与目的基因两条链的特定片段引物会特异性识别目的基因的特定片段（引物的特异性） DNA连接 37℃ 维持培养液的PH 荧光素酶基因的表达不影响淋巴瘤细胞生长荧光素酶基因能在细胞生长分裂过程中稳定表达荧光强度

【解析】

基因工程的工具：

（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。

（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。

（1）利用PCR技术扩增荧光素酶基因片段，首先需要设计两种引物，序列分别为（5'-CAACA·········AAAAC- 3'）和（5' -CAAGT·········TCCCC-3'）。两种引物的碱基序列分别与目的基因两条链的特定片段互补，为确保引物会特异性识别目的基因的特定片段（引物的特异性），设计的引物必须具有一定长度（如15～30个左右碱基）。

（2）用限制性内切酶切割慢病毒载体DNA，用DNA连接酶将其与荧光素酶基因连接，构建出荧光素酶慢病毒重组载体。细胞培养的所需的温度为37℃，需要的气体主要有O2和CO2，利用CO2来维持培养液的PH。

（3）据图（a)可以看出，含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（甲）和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（乙）的生长趋势基本相似，说明荧光素酶基因的表达不影响淋巴瘤细胞生长；据图（b)可以看出，在细胞生长分裂过程中，荧光素酶基因产生的荧光素酶与荧光素酶底物，荧光强度保持不变，说明荧光素酶基因能在细胞生长分裂过程中稳定表达。

（4）将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠（无胸腺）体内，通过检测荧光强度，可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。

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(1)盐水需煮沸并冷却后才可使用，加热煮沸是为了__________________________________________，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响。

(2)菜坛密封的原因是保证乳酸菌发酵所需的______________。蔬菜刚入坛时，其表面带有不抗酸的大肠杆菌和酵母菌等微生物。其中的酵母菌最初的呼吸作用方式是__________，

请写出相关反应式____________________________________。

(3)加入一些“陈泡菜水”的作用是____________________________________________。

(4)制作泡菜的过程中，有机物的干重_________(填“增加”或“减少”），菜坛内有机物的种类__________(填“增加”或“减少”）。

(5)测定亚硝酸盐含量的方法是__________，其原理是：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成___________________，将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。

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