Question

如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI、SamI的酶切位点，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI、SamI在内的多种酶的酶切位点。外源DNA插入到ampR或tctR中会导致相应的基因失活（ampR表示氨苄青霉素抗性基因，tctR表示四环素抗性基因）。回答下列问题：

（1）目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些_________。在基因工程中使用的载体除质粒外，还有___________、动植物病毒等，它们来源不同，在大小、结构、复制以及插入片段大小上也有很大差别。

（2）一般为避免在构建重组质粒时出现自身环化，该质粒用限制酶切割时应该用________酶进行切割，切割过程中消耗了___________个水分子。目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称之为_____________________。构建出来的基因表达载体在受体细胞内表达时，RNA聚合酶识别和结合位点是____________。

（3）若将此质粒用EcolR I酶切割后，与用EcolR I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌（大肠杆菌本身不含该质粒），结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。其中，可在含氨苄青霉素的培养基上生存下来的大肠杆菌是____________，能在同时含氨苄青霉素和四环素的培养基上生存的是______________。

（4）假如该质粒载体为来自土壤农杆菌的Ti质粒，将其携带的抗虫基因整合到某植物细胞的染色体DNA上，将该细胞通过植物组织培养技术培育成植株后，发现其并无抗虫特性，其可能的原因是__________（答出1种情况即可）

Answer 1