Question

【题目】S多肽是构成乙肝病毒的主要成分，现利用基因工程制造乙肝疫苗．回答下列问题：
（1）利用PCR技术扩增S基因前，需根据S基因的核苷酸序列设计种引物，进行PCR时需加热至90～95℃然后冷却至55～60℃，此操作的目的是 ．
（2）将S基因插入Ti质粒中（如图所示）构建基因表达载体时，需要在S基因前后两端分别引入的酶切位点，目的是（答出一点即可）．
（3）用分子杂交技术检测S基因是否转录出mRNA的具体操作过程是 ， 若 ， 则表明转录出了mRNA．
（4）乙肝疫苗的接种需要在一定时期内间隔注射3次，其目的是使机体产生更多的 ．

Answer 1

【答案】
（1）2（两）；使DNA解链，然后使引物结合到互补DNA链上
（2）Xba I和Sac I；防止目的基因（S基因）自身环化、防止目的基因（S基因）反向连接
（3）从受体细胞中提取mRNA，用标记的S基因作探针，与mRNA杂交；显示出杂交带
（4）抗体和记忆（B）细胞
【解析】解：（1）利用PCR技术扩增S基因前，需根据S基因的核苷酸序列设计2（两）种引物；进行PCR时需加热至90～95℃然后冷却至55～60℃，此操作的目的是使DNA解链，然后使引物结合到互补DNA链上．（2）农杆菌中的Ti质粒上的T﹣DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T﹣DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．图中Ti质粒的T﹣DNA上有限制酶Xba I和Sac I的识别位点，因此将S基因插入Ti质粒中构建基因表达载体时，需要在S基因前后两端分别引入Xba I和Sac I 的酶切位点，用两种限制酶切割还能防止目的基因（S基因）自身环化、防止目的基因（S基因）反向连接．（3）用分子杂交技术检测S基因是否转录出mRNA的具体操作过程是从受体细胞中提取mRNA，用标记的S基因作探针，与mRNA杂交，若显示出杂交带，则表明转录出了mRNA．（4）乙肝疫苗的接种需要在一定时期内间隔注射3次，其目的是使机体产生更多的抗体和记忆（B）细胞．
【考点精析】解答此题的关键在于理解基因工程的原理及技术的相关知识，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术．