Question

【题目】白僵菌可感染农业害虫，因而可用来防治农业害虫。由于白僵菌对草丁膦（一种除草剂）敏感，且杀死害虫的能力较弱，科研人员将Bar基因（抗除草剂基因）和毒蛋白基因导入白僵菌进行基因工程改造，流程如图所示：

（1）从苏云金芽孢杆菌中获取的毒蛋白基因，通过PCR技术可在体外大量扩增。该扩增过程需要提供__________种引物，所需添加的酶是_______________。

（2）图中形成重组质粒1时需要的限制酶是_____________；形成重组质粒2除了需要限制酶XbaⅠ外，还需要_____________酶。

（3）将重组质粒2导入经____________处理成为感受态的白僵菌，一段时间后用含有________的平板培养基进行筛选，获得含有Bar基因的重组白僵菌。

（4）为了判断重组白僵菌的杀虫效果，科研人员接下来应该___________________。

Answer 1

【答案】 两 耐热的DNA聚合酶 NcoⅠ、BamHⅠ DNA连接 Ca2+ 草丁膦 将重组白僵菌喷涂在植物叶片上，再用此叶片饲喂害虫，记录单位时间内的害虫死亡的数

【解析】试题分析：据图分析，图中首先利用NcoⅠ、BamHⅠ两种限制酶切割目的基因和质粒，然后再用DNA连接酶形成重组质粒，利用两种限制酶可以防止目的基因和质粒自身连接；然后再利用XbaⅠ酶分别切割重组质粒1和Bar基因，再构建重组质粒2。

（1）PCR技术扩增过程需要2种引物与两条母链配对，并需要耐高温的DNA聚合酶的催化。

（2）据图分析，毒蛋白基因两端是NcoⅠ、BamHⅠ作用位点，因此需要NcoⅠ、BamHⅠ将毒蛋白基因和质粒切割，然后再用DNA连接酶形成重组质粒l。形成重组质粒2的过程需要限制酶XbaⅠ和DNA连接酶。

（3）将重组质粒2与用钙离子处理后处于感受态的白僵菌菌液混合进行转化，一段时间后用含有草丁膦的平板培养基进行筛选，获得含有Bar基因的重组白僵菌。

（4）科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上，以此饲喂饥饿处理的害虫，记录单位时间内的死亡害虫数，以判断重组白僵菌的杀虫效果。