Question

【题目】为获得更好的疗效，科学家运用基因工程技术对抗体进行改造，制备人鼠嵌合抗体，如图1所示。嵌合抗体具体制备过程如图2所示。据图表回答下列问题：

　　　　　表1　引物对序列表

引物对A	P1　AAGCCGGGCGCGCCCGGAA P2　TTCGGCCCGCGTTATGCGCG
引物对B	S1　GTCCGCTAGTGGCTGTG S2　AGCTGGCGTTTAGCCTCG

(1)步骤①构建表达载体时，在目的基因上游插入启动子后，目的基因才有可能表达，据此推测获取目的基因最可能的方法是____________；表达载体所具备的结构有________。

(2)为了扩增出大量目的基因需要用到PCR技术。常规PCR技术一般包括变性、退火、延伸等步骤，退火的目的是________________________。设计引物是PCR技术的关键步骤之一，某同学设计的两组引物如表1所示，请问哪一组(引物对A、引物对B)设计不合理，并说出不合理的理由________________________________________________。

(3)步骤②将重组载体通过共转染导入骨髓瘤细胞的方法是________，骨髓瘤细胞在体外培养时，培养温度和气体条件为________。

(4)相对体外培养骨髓瘤细胞捉取分裂嵌合抗体，从老鼠腹水中抽取得到嵌合单抗的优点是________。

(5)若通过上述方法未得到嵌合单抗，请分析原因___________________________(至少答两点)。

Answer 1

【答案】 cDNA文库法(逆转录法) 具有目的基因、标记基因、复制原点、启动子、终止子 引物与模板发生碱基互补配对 引物对A，引物P1自身碱基互补配对，引物P1和P2部分发生碱基互补配对 显微注射 37 ℃、5%CO2 操作简便 目的基因未成功导入　目的基因未正常表达

【解析】

(2)常规PCR技术一般包括变性、退火、延伸等步骤，其中退火的目的是使引物与模板发生碱基互补配对，以便DNA链的延续。设计引物是PCR技术的关键步骤之一，引物对A在退火时会发生引物P1自身碱基互补配对或者引物P1和P2部分发生碱基互补配对，而失去与模板链结合的机会，其设计是不合理的。

(3)步骤②将重组载体通过共转染导入骨髓瘤细胞的方法是显微注射法，动物细胞培养所需的温度和气体条件为37 ℃、5%CO2。

(4)相对体外培养骨髓瘤细胞捉取分裂嵌合抗体，从老鼠腹水中抽取得到嵌合单抗的优点是操作简便。

(5)若通过上述方法未得到嵌合单抗，可能原因有：目的基因为导入骨髓瘤细胞；导入的目的基因未能正确表达；表达的肽链未能正确拼接。