Question

番茄不易储存与多聚乳糖醛酸酶（PG）有关，科学家将人工合成的反义多聚乳糖醛酸酶基因导入番茄，获得转基因延熟番茄，是番茄的存储时间大大延长。已知质粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四种限制酶切割位点。下图是转基因延熟番茄培育过程的示意图（a mpr为抗氨苄青霉素基因），其中1~ 4是培育过程中的相关步骤，I 、II是相关结构或细胞。请据图作答。

例1  在构建含反义多聚乳糖醛酸酶基因的表达载体时，若用Sma I与Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反应管中有________种片段。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，实际操作中，一般应选用限制酶___________，分别同时对_____________进行切割。

例2  通过农杆菌转化法，可将带有目的基因的T-DNA（重组质粒）导入番茄细胞。导入番茄细胞的目的基因，通常插入到细胞核某一条染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以____________________。上述途径所获得的番茄，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是                    。

 (3) 为了检测番茄细胞是否导入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探针进行检测，也可以向植物组织培养基中加入_______________，以筛选获得导入上述重组质粒的特定受体细胞。

向正常番茄细胞内导入反义多聚乳糖醛酸酶基因后，发现多聚乳糖醛酸酶基因能正常转录形成mRNA，但细胞内却不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。

 

Answer 1

【答案】

(1)   3   Pst I和Hind III ,   醛酸酶基因和质粒（目的基因和载体）

     （2）在番茄体内表达，在形成配子的减数分裂过程中，等位基因发生了的分离

     （3）氨苄青霉素

     （4）多聚乳糖醛酸酶基因转录的mRNA被反义多聚乳糖醛酸酶基因

          转录形成的mRNA所降解（RNA干扰）

【解析】