18．内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽，具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用，其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系．ET主要通过与靶细胞膜上的ET受体结合而发挥生物学效应．ET_A是ET的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ET_A基因在细胞中高效表达，为后期ET_A的体外研究以及拮抗剂的筛选、活性评价等奠定基础．其过程如图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为CCC^↓GGG，限制酶XhoⅠ的识别序列为C^↓TCGAG．请分析回答：

（1）完成过程①需要加入缓冲液、原料、逆转录酶和ATP和引物等，过程①的最后阶段要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是使RNA链和DNA链分开．
（2）过程③和⑤中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是；用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向连接到载体上，以防止目的基因自身环化．
（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录，除图示结构外，完整的基因表达载体还应具有复制原点、终止子等结构（至少写出两个结构）．
（4）过程⑥中，要用CaCl₂预先处理大肠杆菌，使其成为处于容易吸收外界DNA的感受态的细胞．
（5）利用SNAP基因与ET_A基因结合构成融合基因，目的是检测ET_A基因能否表达及表达量．

17．图1和图2分别表示两种获取胚胎干细胞的途径．图1表示的是科学家把4个与胚胎发育相关的特异性基因导入成年小鼠细胞，培养出了诱导多潜能干细胞，称为iPS细胞，类似于胚胎干细胞样细胞，再将iPS细胞转入小鼠乙体内培养，结果如图所示．图2表示研究人员利用小鼠（2N=40）获取单倍体胚胎干细胞的一种方法，哺乳动物单倍体胚胎干细胞技术是遗传学研究的新手段．请分析并回答下列问题：

（1）图1过程中，通常选择传代培养10代以内的成纤维细胞导入特异性基因；成纤维细胞转变为iPS细胞，类似于植物组织培养中的脱分化过程．
（2）克隆培养iPS细胞时，需要加入一定量的抗生素，以防止杂菌污染．早期研究发现在 iPS 细胞诱导培养的过程中会出现大量不具备干细胞功能的细胞，若用维生素C处理，能显著提高iPS细胞的诱导成功率，推测其原因是维生素C可诱导其基因重编程．
（3）研究人员将iPS细胞团注射入缺乏T细胞的小鼠体内，细胞团能继续生长．由此可推测图1中iPS细胞团逐渐退化的原因是小鼠乙（受体）发生免疫反应．
（4）图2中，研究人员需要对实验小鼠丙注射促性腺激素使其超数排卵，从而获得更多的卵母细胞，再利用SrC1₂溶液处理、激活卵母细胞，并在体外培养至[④]囊胚期，再利用流式细胞仪筛选出单倍体细胞．
（5）研究发现，单倍体胚胎干细胞也能分化，形成不同功能的细胞、组织和器官，该技术培育的单倍体动物可成为研究隐性（填“显性”或“隐性”）基因功能的理想细胞模型．

16．为了从动物组织中提取纯净的DNA，首先要快速、有效地消化裂解动物组织细胞．消化裂解动物组织常用的方法有蛋白酶（如蛋白酶K）水解、表面活性剂处理、变性剂处理等．某科研人员拟使用加酶洗衣粉消化裂解猪肌肉样本，并提取猪的DNA．实验步骤如下：
①取500mg剪碎的猪肌肉组织于离心管中，加40mg加酶洗衣粉和1.5mL超纯水混合，在一定温度条件下水浴消化24h；
②加入苯酚、氯仿、异丙醇（25：24：1）混合液使蛋白质变性，抽提蛋白质；
③加0.2mg/mL的RNA水解酶于37℃水浴1h；
④加醋酸钠和无水乙醇，高速离心15min；
⑤用70%乙醇洗涤沉淀两次，风干，得到高纯度的DNA．
请回答有关问题：
（1）加酶洗衣粉可以消化裂解动物组织细胞的原理是洗衣粉中的蛋白酶和表面活性剂等可以破坏细胞膜．
（2）步骤③的目的是水解RNA，去除杂质，步骤④中使用无水乙醇的目的是析出DNA，提取含杂质较少的DNA．
（3）将提取到的DNA用2mol/L的NaCl溶液溶解后，与二苯胺试剂共热，冷却后可观察到溶液呈蓝色．
（4）实验中发现，实验前将新鲜的猪肌肉组织置于液氮冷藏，与室温下放置相同时间的等量猪肌肉组织相比，提取到的DNA含量较多，最可能的原因是低温抑制了DNA酶的活动，减少DNA降解．
（5）如果要将加酶洗衣粉法提取DNA与蛋白酶K法提取DNA的效果进行对比，请简要说明实验设计思路将加酶洗衣粉换成蛋白酶K，重复上述实验步骤，得到DNA后，测定DNA的量和纯度，并与加酶洗衣粉组比较．

15．酵母菌作为一种常见的微生物，在传统和现代生物技术中得到了广泛的应用．请回答下列问题：
（1）酵母菌广泛分布在自然界中，科研人员为了分离、筛选蓝莓果酒专用酵母来改善蓝霉果酒的品质，进行了如下实验：
①取不同品种的成熟蓝莓制果浆，置于适宜温度的恒温培养箱中自然发酵，直至产生大量气泡和明显酒味．取不同品种成熟蓝莓的原因是不同品种蓝莓上附着有不同品种的酵母菌．
②将蓝莓发酵液用无菌水进行梯度稀释后，进行涂布平板操作（每个梯度3个平板），恒温培养2d，根据酵母菌菌落特征挑取单菌落．
③将挑取的单菌落扩大培养后，通过平板划线法分离纯化，然后保存菌种．
④检测筛选菌株的发酵性能，根据实验结果推知，BF-17（品种）对乙醇和酸的耐受性最强，是较理想的酿酒菌种．

品  种	乙醇体积分数/%					pH
	8%	10%	12%	14%	15%	4.00	2.98	2.03	1.48
葡萄酿酒酵母	++++	++++	+	-	-	++++	++++	-	-
BL-21	++++	++++	+	-	-	++++	++++	-	-
BF-09	++++	++++	++	-	-	++++	++++	+	-
BF-17	++++	++++	++	+	-	++++	++++	++	-

（注：+数量表示菌落数量的多少，-表示没有菌落生长）
（2）如图是固定化酵母发酵与游离酵母制作蓝莓果酒发酵的对比结果，从图中可以看出，两者发酵速率相近，但发酵前期游离发酵比固定发酵产生的酒精量多，主要原因是游离酵母和营养液的接触更充分，酒精排出更快；后期游离酵母发酵速度减慢，除了底物浓度降低外，还可能是因为酒精对游离酵母的抑制作用更强．相较于固定化酶技术，固定化酵母细胞常用的方法是包埋法，固定化酵母发酵的主要优点是可固定一系列酶，催化一系列化学反应．

14．花青素是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一．广泛存在于深红色、紫色或蓝色的蔬菜水果中，在酸性条件下偏红，碱性条件下偏蓝．
（1）牵牛花的花瓣颜色主要由花青素决定．凌晨3：00时，花瓣的颜色偏红，理由是黑暗条件下，牵牛花只进行呼吸作用，细胞内二氧化碳含量较高，细胞液pH值下降，偏酸，使花青素显示偏红．
（2）为了使食品有花青素的颜色，需要进行色素的提取，工艺流程如下：
实验原料$→_{添加金属离子研磨}^{加75%酒精}$组织匀浆$→_{搅拌、离心}^{水浴保温70分钟}$上清液→测花青素提取率
若从食品安全角度考虑，研磨时对加入的酒精和金属离子有一共同的要求是要对人无害或有益．兴趣小组分别对水浴温度进行了探究实验．结果显示，水浴温度在69-71℃范围内，提取率较高．他们认为要达到最高提取率，还必须对水浴温度进行优化，并确定以此为探究课题．请为探究实验设计一张实验结果记录表（注意体现实验温度的变化）

水浴温度	69℃			70℃			71℃
分组编号	A	B	C	A	B	C	A	B	C
提取率
平均提取率

．
（3）紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞中也含有花青素而呈紫色．在“观察植物细胞的质壁分离和复原”实验中，对紫色洋葱鳞片叶外表皮临时装片进行了三次观察（如图所示）．

第一次观察时可观察到紫色大液泡几乎充满细胞，大液泡周围只有很薄的无色区域，原因是表皮展平在清水中，细胞吸水，液泡体积增大，几乎充满细胞．第二次观察时可发现细胞的质壁分离首先发生在细胞的角隅处，此时细胞液的浓度将变大（增加），无色区域充满蔗糖（外界）溶液．某学生在第三次观察时，发现质壁分离不能复原，原因之一是蔗糖溶液浓度过高（或质壁分离时间过长），细胞已死亡．

13．为了研究光合作用与呼吸作用的关系，科研人员进行了观察与实验，并绘出相关坐标图．请回答下列问题：

（1）图1为电镜下观察绘制的亚显微结构模式图，图1中①和③结构的基本支架是磷脂双分子层；光照条件下，结构②中形成的产物有ATP、[H]、O₂；光照条件下，结构④中酶的主要功能是催化光合作用的暗反应．
（2）图2表示某种植物黑暗条件下，在O₂浓度分别为a、b、c、d时CO₂释放量和O₂吸收量的关系．假定细胞呼吸的底物都是葡萄糖，在O₂浓度为d时细胞的呼吸方式是（只进行）有氧呼吸，当O₂浓度为a时，无氧呼吸消耗的葡萄糖是有氧呼吸消耗的葡萄糖的5倍．
（3）图3表示光照和温度等适宜条件下，某种植物放在封闭温室大棚内，测得大棚中一昼夜CO₂浓度变化的坐标图．图3的 A、B、C、D四个点中，光合产物积累最多的是C点．大田作物夏季中午光合速率明显下降的过程称作光合作用的午休现象，原因是夏季中午，植物体因温度过高过度失水导致气孔局部关闭，CO₂供应不足，导致暗反应减弱而出现午休现象．据图3推测该植物光合作用有无午休现象？无．若连续三天，该大棚的环境条件保持不变，则该植物的总重量发生的变化是增加．

12．图甲、图乙分别是两类高等生物细胞的亚显微结构模式图，请据图回答：

（1）若图甲表示洋葱叶肉细胞，则④中CO₂进入⑨中被利用至少通过4层生物膜；若图甲表示洋葱根尖分生区细胞，则图中不应该具有的细胞器有⑨⑩（填编号）．
（2）在图甲、图乙所示细胞中，含有遗传物质的结构有③④⑨（填编号），不含生物膜结构的细胞器有⑦⑧（填编号）．
（3）结构②在图甲细胞和图乙细胞的功能不同，图甲细胞中②结构的功能是与细胞壁的形成有关．在甲、乙细胞内，都能合成ATP的场所是④⑥ （填编号）．
（4）若图乙所示的细胞为胰岛B细胞，将³H标记的氨基酸注入该细胞，在该细胞的结构中，³H出现的先后顺序是⑦→⑤→②→①（用箭头和编号表示）．

11．下面是几组同学所做的部分实验，回答下列问题：

组别	实验目的	实验材料	所用试剂
①	植物组织中还原性糖的鉴定	西瓜汁	斐林试剂
②	植物细胞中脂肪的鉴定	花生子叶	酒精、苏丹Ⅲ染液
③	生物组织中蛋白质的鉴定	血浆	双缩脲试剂
④	探究温度对酶活性的影响	淀粉、淀粉酶	斐林试剂
⑤	探究酵母菌的呼吸方式	酵母菌、葡萄糖溶液	澄清石灰水、重铬酸钾

（1）上述各组实验中，所选材料不合理的一组是①．所用试剂不合理的一组是④（以上均填表中序号），原因是斐林试剂鉴定还原糖需要水浴加热，会破坏该实验设定的温度条件，影响实验结果的鉴定，正确的试剂应选用碘液．
（2）实验②中，酒精的作用是洗浮色，与其他实验相比，需用显微镜（仪器）进行观察．
（3）鸡血中蛋白质含量丰富，若用鸡全血做蛋白质的鉴定实验，需增加的实验步骤是将鸡全血静置，待血细胞沉淀后，取上清液进行实验．
（4）实验⑤按照如图装置进行操作，如果两组装置中的澄清石灰水都变浑浊，能否说明酵母菌既能进行有氧呼吸，又能进行无氧呼吸？否，对实验现象准确的描述应该是两组装置中的澄清石灰水都变浑浊，但甲组装置中浑浊程度更大．

10．图中①②③分别表示物质跨膜运输的三种方式，下列表述正确的是（　　）

	A．	脂溶性小分子物质能通过方式①运输
	B．	葡萄糖的跨膜运输的方式为②或③
	C．	方式③的最大运输速率与载体蛋白数量有关
	D．	抑制细胞呼吸对方式②和③的转运速率均有很大影响

9．脂质体是以磷脂等物质制备的中空膜泡状结构的人工膜，可用于介导基因的转移．传统的脂质体是将磷脂、胆固醇或其它脂类的乙醚溶液加入到DNA溶液中，经特殊处理而得到单层或双层的包裹DNA的脂质体小泡，其可被受体细胞内吞而实现基因转移．下列说法错误的是（　　）

	A．	脂质体介导基因转移的原理是膜的流动性，可适用于多种动物受体细胞
	B．	若以植物细胞作为受体细胞，转移前对植物细胞去壁可提高转移效率
	C．	动物细胞膜具有特异性糖蛋白，对导入的脂质体小泡会产生免疫反应
	D．	可在包埋有抗癌药物的脂质体表面插入单克隆抗体，介导癌症的治疗