绿色荧光蛋白(GFP)是由GFP基因表达的一种能在紫外线照射下发出绿色荧光的蛋白质，它首先在水母中发现。如图为培育绿色荧光蛋白转基因猪的流程图，此猪的获得，运用了哪些技术

①转基因技术②核移植技术③早期胚胎培养技术④胚胎移植技术等⑤显微注射技术⑥胚胎分割技术

A．①②③④⑥   B．①②④⑤⑥   C．①②③④⑤   D．①②③④⑤⑥

绿色荧光蛋白GFP能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

（1）若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—，在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点，在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来__________，理由是： ___________________________________________。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是______________________。

（3）获得转基因猪的关键步骤是_____（填序号），GFP基因的作用是作为_______。抑制小猪抗原表达的基因要插入到启动子和_________之间。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是可以避免     _____________________。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：_____________________（用数字表示）。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）  

④表达出蓝色荧光蛋白。

绿色荧光蛋白（简称GFP）含有1条多肽链，由238个氨基酸组成，能发出绿色荧光。下列有关GFP的叙述不正确的是（　　）

A．在控制GFP合成的基因中，脱氧核苷酸的数量应该大于1428个

B．GFP在核糖体上形成，含有238个肽键

C．若GFP基因随机插入一段DNA序列，则可能不能产生正常的GFP

D．转入GFP基因的植物细胞能发出荧光说明该基因在植物细胞中成功表达

绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶是__________。③过程需要的酶是__________。

（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是__________。

（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用__________技术进行检测。

（4）用显微镜可观察到用于⑥过程的猪卵母细胞的卵黄膜和透明带之间有__________个极体。用于⑤过程的猪胎儿成纤维细胞，一般选用传代10代以内的细胞，原因是__________。

（5）由⑦过程获得的重组细胞培育成绿色荧光转基因克隆猪，涉及到的现代生物技术手段有__________。

（6）为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若对⑧过程得到的囊胚阶段胚胎进行分割，要注意__________。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用__________处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

绿色荧光蛋白（简称GFP）含有1条多肽链，由238个氨基酸组成，能发出绿色荧光。下列有关GFP的叙述不正确的是

1. A.
   在控制GFP合成的基因中，脱氧核苷酸的数量应该大于1428个
2. B.
   合成GFP的转录过程需要RNA聚合酶和游离的脱氧核苷酸等参与
3. C.
   将GFP整合到胚胎干细胞中，可用于胚胎发育中细胞的标记定位
4. D.
   转入GFP基因的植物细胞能发出荧光说明该基因在植物中成功表达

绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA一，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶是______。③过程需要的酶是____________。

（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是____________。

（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用____________ 技术进行检测。

（4）用显微镜可观察到用于⑥过程的猪卵母细胞的卵黄膜和透明带之间有______个极体。用于⑤过程的猪胎儿成纤维细胞，一般选用传代10代以内的细胞，原因是__________________。

（5）由⑦过程获得的重组细胞培育成绿色荧光转基因克隆猪，涉及到的现代生物技术手段有__________________。

（6）为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若对⑧过程得到的囊胚阶段胚胎进行分割，要注意________________________。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用__________________处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

15．绿色荧光蛋白（简称GFP）含有1条多肽链，由238个氨基酸组成，能发出绿色荧光。下列有关GFP的叙述不正确的是（　　）

A．在控制GFP合成的基因中，脱氧核苷酸的数量应该大于1428个

B．GFP在核糖体上形成，含有238个肽键

C．若GFP基因随机插入一段DNA序列，则可能不能产生正常的GFP

D．转入GFP基因的植物细胞能发出荧光说明该基因在植物细胞中成功表达

绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶是__________。③过程需要的酶是__________。
（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是__________。
（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用__________技术进行检测。
（4）用显微镜可观察到用于⑥过程的猪卵母细胞的卵黄膜和透明带之间有__________个极体。用于⑤过程的猪胎儿成纤维细胞，一般选用传代10代以内的细胞，原因是__________。
（5）由⑦过程获得的重组细胞培育成绿色荧光转基因克隆猪，涉及到的现代生物技术手段有__________。
（6）为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若对⑧过程得到的囊胚阶段胚胎进行分割，要注意__________。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用__________处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

　 绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA一，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶是______ 。③过程需要的酶是____________。

（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是____________。

（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用____________技术进行检测。

（4）用显微镜可观察到用于⑥过程的猪卵母细胞的卵黄膜和透明带之间有______个极体。用于⑤过程的猪胎儿成纤维细胞，一般选用传代10代以内的细胞，原因是__________________。

（5）由⑦过程获得的重组细胞培育成绿色荧光转基因克隆猪，涉及到的现代生物技术手段有__________________。

（6）为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若对⑧过程得到的囊胚阶段胚胎进行分割，要注意__________________。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用__________________处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

基因工程相关。2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

  （1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来        ，理由是：                                          。

  （2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是              。

  （3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是               。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免           。

  （4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：          （用数字表示）。①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。