下表细胞工程技术应用中各组所选择的实验材料及材料特点与实验目的配置错误的是

A. 1和2     B. 2和3        C. 3和4       D. 1和4

下表细胞工程技术应用中各组所选择的实验材料及材料特点与实验目的配置错误的是

A．1和2                        B．2和3               C．3和4                D．1和4

动物细胞培养技术是动物细胞工程的基础，在动物细胞工程的其他技术中都得到广泛应用。下面是与动物细胞工程相关的问题，

请分析回答：

(1)在进行动物细胞培养时，首先要将动物组织剪碎，然后用一处理，以分散成单个细胞，制成细胞悬液。

(2)动物细胞培养时，要保证细胞必需的营养、适宜的温度和pH条件，还要提供无菌、无毒和适宜的气体环境。为达到无菌、无毒的环境条件，除了要对培养液和培养器具进行消毒外，还要①_________________________________________________

②_________________________________________________

气体环境中C0₂的作用是_______________________________

(3)应用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞，原因是_________________________________________

(4)下图表示单克降抗体的制各过程，请分析回答：

①给小鼠注射特定抗原后产生的、与骨髓瘤细胞融合的细胞是_______

②在细胞融合的过程中，常用的化学诱导剂是_____；培养液中的细胞类型有_______(小鼠产生的细胞和骨髓瘤细胞分别用A、B表示)

③筛选出的杂交瘤细胞所表现出的优良性状是_______

（20分）请结合细胞与细胞工程的知识回答下列两个小题。
Ⅰ（10分）有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：

(1) 若a、b分别是基因型为Hr、hR两个烟草品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用，在光照强度大于800lx时都不能生长。我们应从融合细胞的培养液(只考虑两两融合)中分离出基因型为         的细胞，较为简便的筛选方法是             。
(2) 若a、b表示两种植物体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理是               ，这种育种方法的优点是                             。
(3) 若a、b分别为骨髓瘤细胞和效应B淋巴细胞，则d细胞特点是                。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有                           的特点。
(4) 下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。顺序是                                      

（5）请你再说出一项动物细胞的融合技术的应用                             
Ⅱ．（10分）右图为叶绿体结构模式图，它是进行光合作用的细胞器。光合作用光反应所需的PSⅠ、PSⅡ、Cytb₆/f、ATP酶四类蛋白复合体存在图中③，同化C0₂的全部酶类则存在图中④，为了证实C0₂同化场所在哪里，某实验小组设计了下列实验，请你协助完成“验证C0₂同化场所是在叶绿体的基质而不是在叶绿体的类囊体的膜上”的实验。

1、设计思路：
首先要提取出完整的叶绿体，然后把                      分开，分别检测暗反应活性。
注：暗反应活性是指有无光合产物的生成或有无反应的条件（如酶）。
2、实验步骤：
（1）在适宜的条件下，提取具有生理活性的完整叶绿体。
（2）将提取的完整叶绿体放入          中，然后高速离心，分离得到上清液和沉淀物。
（3）采用以下测定可判别C0₂同化场所：分别在上清液和沉淀物中加入           ，检测有无含有14C的光合产物的生成。也可将步骤(2)获得的上清液和沉淀物进行电泳，检测两者是否含有                      。
3、预期实验结果并得出结论
如果在上清液中检测到暗反应活性，而沉淀物中检测不到暗反应活性，证实            。

（20分）请结合细胞与细胞工程的知识回答下列两个小题。

Ⅰ（10分）有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。下列为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：

(1) 若a、b分别是基因型为Hr、hR两个烟草品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用，在光照强度大于800lx时都不能生长。我们应从融合细胞的培养液(只考虑两两融合)中分离出基因型为          的细胞，较为简便的筛选方法是              。

(2) 若a、b表示两种植物体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理是                ，这种育种方法的优点是                              。

(3) 若a、b分别为骨髓瘤细胞和效应B淋巴细胞，则d细胞特点是                 。由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有                            的特点。

(4) 下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。顺序是                                       

（5）请你再说出一项动物细胞的融合技术的应用                             

Ⅱ．（10分）右图为叶绿体结构模式图，它是进行光合作用的细胞器。光合作用光反应所需的PSⅠ、PSⅡ、Cytb₆/f、ATP酶四类蛋白复合体存在图中③，同化C0₂的全部酶类则存在图中④，为了证实C0₂同化场所在哪里，某实验小组设计了下列实验，请你协助完成“验证C0₂同化场所是在叶绿体的基质而不是在叶绿体的类囊体的膜上”的实验。

1、设计思路：

首先要提取出完整的叶绿体，然后把                       分开，分别检测暗反应活性。

注：暗反应活性是指有无光合产物的生成或有无反应的条件（如酶）。

2、实验步骤：

（1）在适宜的条件下，提取具有生理活性的完整叶绿体。

（2）将提取的完整叶绿体放入           中，然后高速离心，分离得到上清液和沉淀物。

（3）采用以下测定可判别C0₂同化场所：分别在上清液和沉淀物中加入            ，检测有无含有14C的光合产物的生成。也可将步骤(2)获得的上清液和沉淀物进行电泳，检测两者是否含有                       。

3、预期实验结果并得出结论

如果在上清液中检测到暗反应活性，而沉淀物中检测不到暗反应活性，证实             。

研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答

1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是                          ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为        。

2.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是                。

3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是              ， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是    ，这 两种酶作用的化学键都是          。

4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。                      

5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用　　 　　酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

6.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是　　                               　    　。

7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组，并将重组质粒导入原本无amp^R和tet^R  的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌，现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___       _____ ，图三结果显示，多数大肠杆菌内导入的是___            __。

40. ［生物——选修3：现代生物科技专题］（15分）

绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV 蛋白，叶片对 TMV具有抗感染性。烟草是重要的经济作物，由于 TMV 的感染会导致大幅度减产。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如下图所示。

（1）科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因。图中过程①表示____________，获得的DNA必须在两侧添加____________和____________。

（2）过程③构建的重组Ti 质粒时，必须使用____________和____________两种工具酶。

（3）由图分析，在过程③构建的重组Ti 质粒上应该含有卡那霉素抗性基因作为____________，重组Ti 质粒导入烟草体细胞的方法是____________。

（4）在过程⑤培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外，还必须添加____________，以保证受体细胞能培养成再生植株。

（5）过程⑥可采取____________的方法，检测植株是否合成了抗 TMV 蛋白。在个体水平的鉴定过程中，可通过____________的方法来确定植株是否具有抗性。

人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但由于艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果应用基因工程和克隆技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能。其大致过程如下：

Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精液，通过体外受精，形成奶牛受精卵；

Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵；

Ⅲ.电脉冲刺激上述受精卵，促使其形成早期胚胎；

Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

请回答下列问题：

(1)一般情况下，良种奶牛所产生的能用于体外受精的卵母细胞往往数量不足，请举出一种可以获得更多卵母细胞的方法：                                 

                                                  。

(2)步骤Ⅰ中，在体外受精前，需要对奶牛的精子进行             处理。受精时，往往一个卵母细胞只能和一个精子结合，受精过程中防止多精入卵的两道屏障分别是：                         和                                  。

(3)步骤Ⅱ中将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵之前要进行基因表达载体的构建，其目的是                                                          

                      。一个基因表达载体的组成包括                     、

                     、                     、                     。

(4)实验步骤Ⅲ中，进行动物早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐和有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加          和动物血清。

(5)实验步骤Ⅳ中，应选择性别为          的奶牛胚胎进行移植。

(6)若需迅速得到大量转基因奶牛，现有两种处理方法：

方法A：在步骤Ⅳ中将早期胚胎切割成二等份，让其分别发育成一头小牛。进行上述操作时，应选择发育至                       阶段的胚胎进行操作，分割时必须注意要将早期胚胎中的                均等分割。

方法B：在步骤Ⅳ中将早期胚胎细胞的细胞核移植到普通黄牛的            

              细胞中，使其重组并发育成新胚胎，进行胚胎移植后使之继续发育成小牛。

上述两种方法中，最能保持步骤Ⅳ 中早期胚胎细胞遗传特征的是方法________。

人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但由于艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果应用基因工程和克隆技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能。其大致过程如下：
Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精液，通过体外受精，形成奶牛受精卵；
Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵；
Ⅲ.电脉冲刺激上述受精卵，促使其形成早期胚胎；
Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。
请回答下列问题：
(1)一般情况下，良种奶牛所产生的能用于体外受精的卵母细胞往往数量不足，请举出一种可以获得更多卵母细胞的方法：                                 
                                                 。
(2)步骤Ⅰ中，在体外受精前，需要对奶牛的精子进行            处理。受精时，往往一个卵母细胞只能和一个精子结合，受精过程中防止多精入卵的两道屏障分别是：                        和                                 。
(3)步骤Ⅱ中将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵之前要进行基因表达载体的构建，其目的是                                                         
                     。一个基因表达载体的组成包括                    、
                    、                    、                    。
(4)实验步骤Ⅲ中，进行动物早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐和有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加         和动物血清。
(5)实验步骤Ⅳ中，应选择性别为         的奶牛胚胎进行移植。
(6)若需迅速得到大量转基因奶牛，现有两种处理方法：
方法A：在步骤Ⅳ中将早期胚胎切割成二等份，让其分别发育成一头小牛。进行上述操作时，应选择发育至                      阶段的胚胎进行操作，分割时必须注意要将早期胚胎中的               均等分割。
方法B：在步骤Ⅳ中将早期胚胎细胞的细胞核移植到普通黄牛的            
             细胞中，使其重组并发育成新胚胎，进行胚胎移植后使之继续发育成小牛。
上述两种方法中，最能保持步骤Ⅳ中早期胚胎细胞遗传特征的是方法________。