绿色荧光蛋白(GFP)是由GFP基因表达的一种能在紫外线照射下发出绿色荧光的蛋白质，它首先在水母中发现。如图为培育绿色荧光蛋白转基因猪的流程图，此猪的获得，运用了哪些技术

①转基因技术②核移植技术③早期胚胎培养技术④胚胎移植技术等⑤显微注射技术⑥胚胎分割技术

A．①②③④⑥   B．①②④⑤⑥   C．①②③④⑤   D．①②③④⑤⑥

绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶是__________。③过程需要的酶是__________。

（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是__________。

（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用__________技术进行检测。

（4）用显微镜可观察到用于⑥过程的猪卵母细胞的卵黄膜和透明带之间有__________个极体。用于⑤过程的猪胎儿成纤维细胞，一般选用传代10代以内的细胞，原因是__________。

（5）由⑦过程获得的重组细胞培育成绿色荧光转基因克隆猪，涉及到的现代生物技术手段有__________。

（6）为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若对⑧过程得到的囊胚阶段胚胎进行分割，要注意__________。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用__________处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

       绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶足③过程需要的酶是____．

（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是           。

（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用       技术进行检测。

（4）图中猪的卵母细胞应处于________期，此时在显微镜下可观察到在卵黄膜和透明带之间有

           个极体。用于核移植的导入了基因表达载体的猪胎儿成纤维细胞一般都选用传代10代以内的细胞的原因是____           。

（5）由重组细胞培育得到绿色荧光转基因克隆猪过程中涉及到的现代生物技术手段有      ，生殖方式为____              。

（6）假如该过程得到了一个早期胚胎，为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法，分割时应选择_        ___或囊胚。对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意               。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用                   处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶是__________。③过程需要的酶是__________。
（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是__________。
（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用__________技术进行检测。
（4）用显微镜可观察到用于⑥过程的猪卵母细胞的卵黄膜和透明带之间有__________个极体。用于⑤过程的猪胎儿成纤维细胞，一般选用传代10代以内的细胞，原因是__________。
（5）由⑦过程获得的重组细胞培育成绿色荧光转基因克隆猪，涉及到的现代生物技术手段有__________。
（6）为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若对⑧过程得到的囊胚阶段胚胎进行分割，要注意__________。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用__________处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

绿色荧光是由绿色荧光蛋白发出的，为培育能发出绿色荧光的小鼠，人们设计了如下的流程：

据图回答下列问题：

（1）绿色荧光基因通常可以从基因文库中获取，含有一种生物所有基因的文库称为___  _____________。

（2）A过程是基因工程的核心，常用到的工具酶有限制性核酸内切酶和          ，它们作用的化学键是___    ____。一个基因表达载体的组成，除了目的基因和复制原点外，还必需有      ___  、            以及标记基因。

（3）B过程常用的方法是____________，进行D过程前，利用____________技术可以获得数目更多且基因型完全相同的绿色荧光小鼠。

（4）也有人设想培育能发光的树，白天做行道树，夜晚做路灯照明。可将荧光蛋白基因导入植物的体细胞中，再利用_______________________技术最终培育成植物体。

（5）在特制的荧光体视显微镜下可以看到，荧光小鼠的皮肤、脑部、肺部发出绿色荧光，可观察胚胎干细胞在体内发育的走向。例如，科研人员将神经干细胞植入小鼠体内治疗帕金森，以前没有荧光鼠的时候，很难分辨打入小鼠体内的神经干细胞与小鼠自身的细胞的不同。现在要研究打入小鼠体内的神经干细胞的走向，简要写出操作思路：       ______。

[生物一一一选修3：现代生物科技专题]（15分）
绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶足③过程需要的酶是____．
（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是__________。
（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用__________技术进行检测。
（4）图中猪的卵母细胞应处于________期，此时在显微镜下可观察到在卵黄膜和透明带之间有__________个极体。用于核移植的导入了基因表达载体的猪胎儿成纤维细胞一般都选用传代10代以内的细胞的原因是__________。
（5）由重组细胞培育得到绿色荧光转基因克隆猪过程中涉及到的现代生物技术手段有__________，生殖方式为__________。
（6）假如该过程得到了一个早期胚胎，为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法，分割时应选择__________或囊胚。对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意__________。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用__________处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

[生物一一一选修3：现代生物科技专题]（15分）

绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶足③过程需要的酶是____．

（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是__________。

（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用__________技术进行检测。

（4）图中猪的卵母细胞应处于________期，此时在显微镜下可观察到在卵黄膜和透明带之间有__________个极体。用于核移植的导入了基因表达载体的猪胎儿成纤维细胞一般都选用传代10代以内的细胞的原因是__________。

（5）由重组细胞培育得到绿色荧光转基因克隆猪过程中涉及到的现代生物技术手段有__________，生殖方式为__________。

（6）假如该过程得到了一个早期胚胎，为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法，分割时应选择__________或囊胚。对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意__________。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用__________处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

2007年12月16日《北京晨报》报道，上海诞生世界首例携绿色荧光蛋白基因的转基因克隆兔，为研究疑难杂症奠定了基础。专家介绍，从外表看上去，克隆兔并没什么与众不同的地方，但通过设备检测会发现它的体内可发出明亮的绿色荧光。由于兔子克隆胚胎发育率低、怀孕率低、出生后死亡率高，导致了科学家较难培育出转基因克隆兔。下面是我国胎兔(妊娠20天左右的兔胚胎)背部皮肤成纤维细胞克隆试验基本过程：

(1)为便于在①过程中与绿色荧光蛋白基因连接，质粒应该具有的一个明显特点是________________________________________________________________________。

(2)在②过程进行转基因体细胞的筛选时，采取的选择措施是

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(3)在③过程培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、________和________等。

(4)对于上述过程叙述合理的是(　　)

A．该培养过程采用了转基因技术、核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术等

B．在③过程进行重组细胞培养时，要不断的用胰蛋白酶将其制成单细胞悬浮液

C．甲兔实际为妊娠20天的兔胚胎，原因是此时的细胞还没有分化，分裂能力很强

D．该荧光兔的性别应该与乙兔相同

(5)研究小组工作人员还指出，转基因克隆兔由于基因(除荧光蛋白基因外)与原来兔子一样，同样具有生殖能力，它可以与家兔交配产下后代，因此大家期待这只转基因克隆兔能够长大，并进一步繁衍后代，从而为人们研究“发光基因”是否具有遗传性提供可靠依据。假设该克隆兔为雌性个体，请写出判断“发光基因”是否具有遗传性的实验思路及预测结果结论。

实验思路： _______________________________________________________________

________________________________________________________________________。

预测结果结论：①_______________________________________________________

________________________________________________________________________；

②________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

请根据上述材料回答下列问题：

(1)过程①必需用到的工具酶是________。

(2)过程②将基因表达载体导入小鼠受精卵时，采用最多也最有效的方法是________________。然后还可以通过________技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已导入成功。

(3)在进行过程④前，利用________技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。

(4)GFP基因与目的基因一起构建到运载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能，且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以运用作为基因表达载体上的________。