Question

【题目】某转基因牛的生产技术流程如图。请回答：

（1）利用过程①的方法构建的基因文库是____________________（填“基因组文库”或“部分基因文库”）；PCR技术大量扩增此目的基因的前提是__________________________，以便合成引物；PCR扩增过程经过变性、复性和__________三个步骤。

（2）转入生长激素基因的牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，过程②中，将目的基因与_________的启动子等调控组件重组在一起构建重组质粒，通过________法导入受精卵中，然后利用胚胎工程的______________________________ (答出2项)技术手段获得转基因牛。

（3）该转基因牛进入泌乳期后，其分泌的乳汁中并未含有人的生长激素，可能的原因是_________________________。

Answer 1

【答案】部分基因文库 要有一段已知目的基因的核苷酸（碱基）序列 延伸 乳腺蛋白基因 显微注射 早期胚胎培养、胚胎移植 导入的目的基因未能表达或目的基因与运载体反向连接

【解析】

1、基因组文库为全部基因文库，cDNA文库为部分基因文库，二者的来源不同，前者为DNA用限制酶切割所获得的一定大小范围的DNA，后者为mRNA经反转录得到的互补DNA，基因组文库所包含的信息大于cDNA文库。

2、基因的表达需要启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列， 若要转入生长激素基因的牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，则人生长激素基因的首端必须含有乳腺蛋白基因的启动子。

（1）图示中生长激素基因是通过以mRNA为模板逆转录形成的，故为部分基因文库。PCR是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术，利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列作为引物，以便合成引物；利用PCR扩增目的基因的过程由高温变性（90～95℃）、低温复性（55～60℃）、适温延伸（70－75℃）三个步骤构成一个循环。

（2）过程②为基因表达载体的构建，若要人的生长激素基因在牛的乳腺细胞中表达并随乳汁分泌出来，需要将人的生长激素基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起构建重组质粒。将目的基因导入动物细胞常用显微注射法。将导入目的基因的受精卵在体外利用早期胚胎培养技术培养形成早期胚胎，并利用胚胎移植技术将早期胚胎移植入母牛体内孕育成转基因个体。

（3）由于构建基因表达载体时运载体不一定和目的基因进行了结合，以及在结合目的基因时可能与运载体进行了反向结合，所以尽管在导入目的基因后检测到了受体细胞中含有运载体，但这样的受体细胞中并不会形成目的基因的产物。综上分析，若该转基因牛进入泌乳期后，其分泌的乳汁中并未含有人的生长激素，可能的原因是导入的目的基因未能表达或目的基因与运载体反向连接。