回答下列有关基因工程和克隆技术的问题。（10分）
2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
63、说出绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中用到了哪些生物工程技术？
利用了哪些原理？ （本题答案从下列所给选项中选择填写）
①转基因技术；②细胞核移植技术；③胚胎移植技术；④干细胞技术；⑤动物细胞培养技术
⑥基因突变；⑦基因重组；⑧动物细胞核具有全能性；⑨动物细胞具有全能性
64、过程①②中必需用到的酶分别是 和 。绿色荧光蛋白基因之所以能与质粒重组，原因是 。
65、早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及 等物质。
通过上图中过程①的方法获取目的基因的数量是有限的，要获得大量的绿色荧光蛋白基因可以利用PCR技术。PCR扩增反应（如下图所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸点的条件下，发挥延伸DNA子链的作用，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。请回答：
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PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图：
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66、你认为TaqDNA聚合酶一定是从下列哪种生物体细胞中分离提取的？
A．水母细胞 B．猪胎儿成纤维细胞 C．极端嗜热菌 D．大肠杆菌
67、下面的表达式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，为什么？ 。
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68、用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点和标出碱基对数。（2分）
科目：高中生物 来源：2011年普通高等学校招生全国统一考试生物卷（上海） 题型：综合题
回答下列有关基因工程的问题。
(1)基因工程中使用的限制酶，其特点是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。
(2)将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（可多选）
| A．X－1 |
| B．X－2 |
| C．X－3 |
| D．X－4 |
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科目：高中生物 来源：2010年福建省泉州第第七中学高二下学期期中考试生物卷 题型：综合题
（11分）回答下列有关基因工程的相关问题
（1）“分子手术刀”是指：＿＿＿＿＿，其来源主要是从＿＿＿＿＿生物中分离纯化出来的，其切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：＿＿＿＿＿末端和＿＿＿＿＿末端
（2）“分子缝合针”是指：＿＿＿＿＿，催化形成的是两个核苷酸之间的＿＿＿＿＿键。
（3）“分子运输车”是指载体，最常用的载体是＿＿＿＿＿,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（4）基因工程的基本操作程序：
第一步：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；第二步：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；第三步：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；第四步：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
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科目：高中生物 来源：2011-2012学年浙江省十二校新高考研究联盟高三第一次联考生物试卷 题型：综合题
回答下列有关基因工程和细胞工程、胚胎工程的问题：
（1）在基因工程的具体操作中，源自不同生物的DNA之所以能够重组的原因是：
▲ ；相同的基因在不同的生物体内，都能成功表达出相同的产物，其原因是： ▲ 。
（2）在基因工程中，使用标记基因的目的是： ▲ ；基因工程最终获得成功的标志是： ▲ 。
（3）在植物组织培养的再分化过程中，若要将愈伤组织诱导出根，则植物生长调节剂的浓度配比应为：生长素浓度 ▲ 细胞分裂素浓度（填“大于”、“小于”或“等于”）。
（4）动物细胞克隆（克隆培养法）要取得成功的最基本要求是 ▲ 。为提高克隆形成率，还应该在培养基中加入 ▲ 以支持生长。同时，使用CO2培养箱用于 ▲ 。
（5）在胚胎工程中，若要获得多个卵细胞，则需对母畜作 ▲ 处理，若要出现“不同的母亲产下完全相同的后代”这一现象，则使用的技术为 ▲ 。
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科目：高中生物 来源：2011-2012学年宁夏高三上学期第一次月考（理综）生物试卷 题型：综合题
【生物——选修3现代生物科技专题】（15分）
请回答下列有关基因工程的问题：
（1）如果用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的 片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体就叫做这种生物的 。
（2）一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有 ， 以及 。
（3）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为 。将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是 法。转基因动物中采用最多，也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法是 。大肠杆菌最常用的转化方法是：首先用 处理细胞，使细胞处于一种 的生理状态，这种状态的细胞被称作感受态细胞。然后将重组表达载体DNA溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度条件下促进 ，完成转化过程。
（4）目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。首先，要检测转基因生物 上是否插入了目的基因。其次，还需要检测目的基因是否 。最后检测目的基因是否 。
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科目：高中生物 来源：2011年普通高等学校招生全国统一考试生物卷（上海） 题型：综合题
回答下列有关基因工程的问题。
(1)基因工程中使用的限制酶，其特点是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。
(2)将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（可多选）
A．X－1
B．X－2
C．X－3
D．X－4
(3)若将上图所示X－1、X－2、X－3、X－4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
(4)如果X－1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X－2（Tcr基因的长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为＿＿＿＿＿＿＿＿＿对碱基。
(5)若将外源的Tcr基因两端用E2切开，再与用E2切开的X－1混合连接，并导入大肠杆菌细胞，结果显示，含X－4的细胞数与含X－1的细胞数之比为13，增大DNA连接酶用量能否提高上述比值？＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
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67. TaqDNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上（不是连接磷酸二酯键）
