Question

【题目】【加试题】回答下列（一）、（二）小题：

（一）不同浓度还原型谷胱甘肽（GSH）处理对甘蓝泡菜中硝酸还原酶（NR）活性和亚硝酸盐含量的影响如图所示。

请回答：

（1）甘蓝泡菜的腌制和样品处理：腌制甘蓝泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是___________。甘蓝样品处理过程中，加硫酸锌产生沉淀后，水浴加热的目的是___________。然后冷却至室温，用滤纸过滤，用水淋洗2~3次，将___________在容量瓶中定容。

（2）测定亚硝酸盐含量：取10mL样品溶液，进行显色处理。用光程为1cm的_________在550nm处测定光密度值。

（3）甘蓝泡菜发酵过程中NR活性和亚硝酸盐含量均呈______________的趋势。添加不同浓度的GSH处理均可_________NR活性和亚硝酸盐含量的峰值。当添加GSH的质量分数较低时，NR活性和亚硝酸盐含量随着GSH浓度的增大而_________。

（二）现采用建立转基因小鼠的方法来研究CA65基因的作用，请回答有关的问题：

（1）CA65转基因小鼠载体的构建：将CA65基因用______________酶切后，插入到角蛋白基因中，构建CA65转基因载体。

（2）CA65转基因小鼠的获得与检测：用____________法将转基因载体注射到小鼠的__________中，体外培养获得早期胚胎再__________到代孕母鼠子宫角或____________中。小鼠出生10天后提取其DNA，用__________技术扩增CA65基因来检测CA65转基因小鼠。

（3）转基因组与野生对照组相比，CA65转基因小鼠的淋巴管明显增多，管径变粗。该实验结果说明CA65可以____________________。

Answer 1

【答案】 杀灭杂菌（去除氧气） 进一步让蛋白质沉淀 滤液和洗涤液 比色杯 先上升后下降 抑制 降低 限制性核酸内切酶 显微注射 受精卵 胚胎移植 输卵管 PCR 诱导淋巴管的增生

【解析】（一）试题分析：分析两坐标系中多组曲线发现，甘蓝泡菜发酵过程中NR活性和亚硝酸盐含量均呈先上升后下降的趋势，同时添加不同浓度的GSH处理均可抑制NR活性和亚硝酸盐含量的峰值。

（1）腌制泡菜时，所用盐水需煮沸的目的主要是杀灭杂菌同时也去除氧气（因为需要厌氧发酵）。样品处理过程中需加硫酸锌产生沉淀，之后水浴加热的是为了进一步让蛋白质沉淀。用滤纸过滤并用水淋洗2～3次，将滤液和洗涤液在容量瓶中定容。

（2）测定光密度值时需要用光程为1cm的比色杯在550nm处测定。

（3）根据前的分析可知，甘蓝泡菜发酵过程中NR活性和亚硝酸盐含量均呈先上升后下降的趋势。添加不同浓度的GSH处理均可抑制NR活性和亚硝酸盐含量的峰值。当添加GSH的质量分数较低时，NR活性和亚硝酸盐含量随着GSH浓度的增大而降低。

（二）（1）构建基因表达载体时，需要用限制性核酸内切酶切割目的基因（CA65基因），再用DNA连接酶将其连接在载体（角蛋白基因）中。

（2）将目的基因导入动物细胞培育转基因动物时，通常用显微注射法将转基因载体注射到小鼠的受精卵中，体外培养获得早期胚胎后，再胚胎移植到代孕母鼠子宫角或输卵管中。扩增目的基因需要用PCR技术。

（3）若转基因组与野生对照组相比，CA65转基因小鼠的淋巴管明显增多，管径变粗。该实验结果说明CA65可以诱导淋巴管的增生。