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    【题目】R一7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列（3′-UTR）结合，进而影响基因的表达．为研究R一7是否影响家蚕基因B（调控家蚕眼睛发育）的表达，科研人员将基因B中对应3′一UTR的DNA片段与荧光素酶基因（R一7不影响荧光素酶基因的表达）重组后导入家蚕胚胎细胞观察其表达结果．请回答：

    （1）利用PCR技术扩增基因B对应3′一UTR的DNA片段，应先依据该基因的一段核甘酸序列合成相应的___________．

    （2）利用______酶可将上述DNA片段插入荧光素酶基因表达载体（如图1）上的位点______，构建重组载体．

    （3）将重组载体与R一7共同导入家蚕胚胎细胞，同时应设置两个对照组，即将荧光素酶基因表达载体、__________分别导入两组家蚕胚胎细胞．

    （4）科研人员分别从实验组和对照组细胞中提取________，经处理检测后获得相对荧光值（在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光），其结果如图2．

    依据实验结果可推断，R一7影响基因B的表达，即通过遵循__________原则，R一7与基因B所转录的mRNA的3’-uTR结合，进而__________（填“促进”或“抑制”）基因B的表达．

    【答案】引物 限制酶和DNA连接酶 2 重组载体 蛋白质 碱基互补配对原则 抑制

    【解析】

    基因工程的基本操作步骤：①获取目的基因；②构建基因表达载体；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定。本题的目的基因是家蚕基因B，运载体为荧光素酶表达载体，重组载体导入家蚕家蚕胚胎细胞，通过比较荧光量来比较R一7对家蚕基因B（调控家蚕眼睛发育）的表达作用。

    （1）利用PCR技术扩增基因B对应3′一UTR的DNA片段，应依据该基因的一段核甘酸序列先合成引物，使游离的脱氧核苷酸，在引物牵引下，按照碱基互补配对原则合成子链。

    （2）基因工程的“剪刀”是限制酶，用限制酶切割运载体和目的基因，基因工程的“针线”是DNA连接酶，将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子；目的基因插入的位置应该在启动子和终止子之间，且不能破坏荧光素基因，位点1有荧光素基因，位点3在终止子后，因此可将上述DNA片段插入荧光素酶基因表达载体上的位点2。

    （3）为探究R一7是对家蚕基因B的表达，自变量为是否添加R一7，实验组为：重组载体与R一7共同导入家蚕胚胎细胞， 那么对照组应为：荧光素酶基因表达载体、重组载体分别导入两组家蚕胚胎细胞。

    （4）基因表达产物是蛋白质，因此从细胞中提取的物质是蛋白质；R一7影响基因B的表达，即影响基因B的转录和翻译，即通过遵循碱基互补配对原则，R一7与基因B所转录的mRNA的3’一uTR结合，使基因B表达的翻译受到影响，抑制基因B的表达。

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