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    7．限制性核酸内切酶（也称限制酶）是基因工程中常用的工具酶，不同的限制酶用于切割不同的DNA片断，请据以下资料回答问题：
    （1）某线性DNA分子分别用限制酶HindⅢ和SmaⅠ消化，然后用这两种酶混合消化，得到如下片段（kb为千个碱基对）：
    HindⅢ2.5kb，5.0kb              SmaⅠ2.0kb，5.5kb
    HindⅢ和SmaⅠ2.5kb，3.0kb，2.0kb
    限制酶HindⅢ和SmaⅠ在此DNA分子中共有一个识别序列．两酶混合消化的片段再用限制酶EcoRⅠ消化，结果导致凝胶上3.0kb的片段消失，产生1.5kb的新片段．请指出限制酶EcoRⅠ的切割位点有一个．
    （2）现有一长度为1000碱基对（by）的DNA分子，用限制酶Eco R1酶切后得到的DNA分子仍是1000by，说明此DNA分子为环状（线性或环状），用Kpn1单独酶切得到400by和600by两种长度的DNA分子，用EcoRI、Kpnl同时酶切后得到200by和600by两种长度的DNA分子．该DNA分子的酶切图谱是（要求写出酶名称并标明长度）
    （3）基因表达载体的构建是基因工程的关键步骤之一，已知有4种限制酶，其中1号和4号切割DNA后产生的是平末端，2号和3号酶切产生的是黏性末端．含目的基因的DNA片段和质粒的酶切序列如图所示：

    请设计一个酶切方案，构建最佳基因表达载体（重组质粒）：目的基因用2和4两种酶切；而质粒用1和2 两种酶切割，再用DNA连接酶进行连接．

    分析 基因工程技术的基本步骤：
    1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

    解答 解：（1）线性DNA分子在限制酶HindⅢ的切割下形成2.5kb和5.0kb的片段，因此限制酶HindⅢ在该DNA分子上具有一个酶切位点；同理可得，限制酶SmaⅠ在该DNA分子上也具有一个酶切位点．两种酶同时切割时，根据所得片段可以判断，限制酶HindⅢ的酶切位点在DNA分子左侧的2.5kb处，限制酶SmaⅠ的酶切位点在DNA分子右侧的2.0kb处，中间刚好有个3.0kb的片段．再用限制酶EcoRⅠ处理，结果导致凝胶上3.0kb的片段消失，产生一个1.5kb的新片段，说明限制酶EcoRⅠ的酶切位点就在3.0kb片段的中间位置，如图，切点有1个．
    （2）由于DNA分子用限制酶Eco R1酶切后得到的DNA分子仍是1000bp，说明此DNA分子为环状DNA．用Kpn1单独酶切，得到400bp和600bp两种长度的DNA分子片段，说明该酶在该DNA分子上具有两个切点；用EcoRI、Kpnl同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分子片段，说明EcoRI的切点刚好在400bp片段的中间，由此画图即可．
    （3）目的基因用酶2和4切割，质粒用酶1和2切割，由于1和4切出的是平末端，可以相连，因而目的基因可以与质粒重组，且又能防止自身环化．
    故答案为：
    （1）一   一
    （2）环状、
    （3）2和4  1和2

    点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、使用的工具及操作步骤，掌握各步骤中应注意的细节，再结合所学的知识准确答题，属于考纲理解和应用层次的考查．

    练习册系列答案
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    下列关于溶酶体的叙述正确的是

    A．溶酶体是细胞内的“消化车间”，可以合成多种水解酶，分解衰老损伤的细胞器

    B．被溶酶体分解后的产物全部都被排出细胞外

    C．溶酶体膜被硅尘破坏后会导致肺功能受损

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    D．核膜上的核孔可以让蛋白质和RNA自由进出

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    15．细胞与细胞之间可以通过信号物质进行信息传递（如图所示）．下列说法不正确的是（　　）
    A．若信号物质的受体分布于细胞膜上，则体现了细胞膜参与细胞间信息交流的作用
    B．T细胞产生的淋巴因子作为信号物质可作用于B细胞，促使其增殖和分化
    C．若分泌的信号物质是小肠黏膜细胞，则靶细胞是胰腺细胞
    D．若分泌的信号物质是传入神经细胞，信号物质可使肌肉或腺体细胞发生膜电位的变化

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    2．某含1000个碱基对的DNA分子双链均被标记，其中腺嘌呤400个，将该DNA分子置于不带标记的培养基中连续复制3次，则下列叙述错误的是（　　）
    A．子代DNA分子中带放射性标记的占总数的$\frac{1}{4}$
    B．带放射性标记的DNA分子只有一条链被标记
    C．该过程中需要消耗鸟嘌呤4200个
    D．子代DNA分子中带标记的脱氧核苷酸链占$\frac{1}{4}$

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    12．SARS病毒、蓝藻、变形虫、玉米都具有（　　）
    A．细胞结构B．细胞分裂C．染色体D．核酸

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    18．如图1为细胞呼吸过程，其中E表示物质，A～D表示主要步骤，请回答下列问题：

    （1）据如图1回答下列问题：
    ?人体内可以进行的过程为ABCD（填字母），马铃薯块茎可以进行的过程为ABCD．
    ?请写出有氧呼吸的总反应式C6H12O6+6O2+6H2O$\stackrel{酶}{→}$6CO2+12H2O+能量．?产H2O的阶段是D（填字母），反应场所是线粒体内膜．
    （2）如图2中阴影部分的面积代表细胞呼吸释放的二氧化碳总量．
    （3）如图2为某种植物的非绿色器官在不同氧浓度下CO2的释放量与O2的吸收量的变化，请据图回答问题：
    在0点时，该器官的细胞呼吸类型是无氧呼吸．在O2浓度为10%以下时（不包括0点），该器官的呼吸类型是有氧呼吸与无氧呼吸，因为二氧化碳的释放总量大于氧气的消耗量．

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    14．同一生物个体的不同体细胞中的DNA、RNA和蛋白质的种类（　　）
    A．DNA、RNA和蛋白质的种类均不同B．DNA、RNA和蛋白质的种类均相同
    C．DNA相同、RNA和蛋白质不同D．DNA和RNA相同、蛋白质不同

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    14．下列激素中，跟人体的水盐平衡调节有关的激素是（　　）
    A．胰岛素B．抗利尿激素C．生长激素D．胰高血糖素

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