Question

【题目】下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别位点，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因．

（1）基因工程中使用的限制酶，其特点是 ．
（2）将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X﹣1混合连接，连接后获得的质粒类型有 ． （多选）
①X﹣1 ②X﹣2 ③X﹣3 ④X﹣4
（3）若将上图所示X﹣1、X﹣2、X﹣3、X﹣4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上．在这两种培养基上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有 ．
（4）如果X﹣1用E1酶切，产生850对碱基和3550对碱基两种片段：那么质粒X﹣2（Tcr基因的长度为1200对碱基）用E2酶切后的片段长度为对碱基．

Answer 1

【答案】
（1）特异性地识别和切割DNA
（2）①②③
（3）无质粒细胞和含X﹣3的细胞
（4）4750
【解析】解：（1.）基因工程中使用的限制酶，其特点是特异性地识别和切割DNA．
（2.）因目的基因和质粒都是用E1切开且质粒上有两个E1酶切位点，故Apr基因和Tcr基因的黏性末端相同，既可能出现Apr基因和X﹣1连接的产物（X﹣1），也可能出现Tcr基因和X﹣1连接的产物（X﹣2），还可能出现X﹣1两端连接形成的产物（X﹣3）．
（3.）X﹣1含有Apr基因，该基因表达后对青霉素有抗性，X﹣2含有Tcr基因，该基因表达后对四环素有抗性，X﹣3不含抗性基因，X﹣4同时含有Apr和Tcr基因，Apr和Tcr基因表达后，对青霉素、四环素都有抗性．故而在含有青霉素或四环素的两种培养基上不能生长的大肠杆菌中不含X﹣1、X﹣2、X﹣4，即无质粒细胞和含X﹣3的细胞．
（4.）用E1酶切X﹣1，产生850对碱基的Apr基因大部分碱基片段和3550对碱基含有E2酶切位点的片段．与Tcr基因形成含有4750个碱基对的X﹣2质粒．用E2酶切割质粒，由环状变为链状，碱基对数不变．
【考点精析】认真审题，首先需要了解基因工程的原理及技术(基因工程的原理是利用DNA重组技术)．