[题目]某一质粒载体如图所示.外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因.Tetr表示四环素抗性基因)．有人将此质粒载体用BamHI酶切后.与用BamHI酶切获得的目的基因混合.加入DNA连接酶进行连接反应.用得到的混合物直接转化大肠杆菌.结果大肠杆菌有的未被转化.有的被转化．被转化的大肠杆菌有三种.分� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）．有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化．被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌．回答下列问题：
（1）限制性核酸内切酶作为基因工程的工具，其作用特点是．
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是；并且和的细胞也是不能区分的，其原因是．在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有的固体培养基．
（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的模板来自于．

【答案】
（1）识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开
（2）二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长；含有质粒载体；含有插入了目的基因的重组质粒（或重组质粒）；二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长；四环素
（3）噬菌体
【解析】解：（1）限制性核酸内切酶作为基因工程的工具，限制酶能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开．（2）由于未被转化的和仅含有环状目的基因的大肠杆菌中不含有氨苄青霉素抗性基因，因此如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，未被转化的和仅含有环状目的基因的大肠杆菌均不能存活，因此两者是不能区分的；含有质粒的大肠杆菌和含重组质粒的大肠杆菌的细胞由于均含有氨苄青霉素抗性基因，在含有氨苄青霉素的培养基上都能生长，因此两者也是不能区分的．在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有四环素的固体培养基，即含有重组质粒的大肠杆菌在其中不能生长，而含有普通质粒的大肠杆菌能生长．（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的模板来自于噬菌体，原料来自于受体细胞．所以答案是：（1）识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开；（2）二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长；含有质粒载体；含有插入了目的基因的重组质粒（或重组质粒）；二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长；四环素；（3）噬菌体
【考点精析】解答此题的关键在于理解基因工程的原理及技术的相关知识，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术．

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