[题目]红细胞含有大量血红蛋白.红细胞的机能主要是由血红蛋白完成.血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳.我们可以选用猪.牛.羊或其它脊椎动物的血液进行实验.来提取和分离血红蛋白.请回答下列有关问题:(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:样品处理. . 和 .(2)样品处理包括红细胞的洗涤. . 和四步.红细胞洗涤次数不能过少.否则 ,离心速度和� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其它脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：

（1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：样品处理、_________________、______________和__________________。

（2）样品处理包括红细胞的洗涤、______________、__________________和________________________四步。红细胞洗涤次数不能过少，否则________________________；离心速度_______和时间______会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。

（3）凝胶色谱柱在装填过程中，凝胶充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，在色谱柱下端的尼龙管的螺旋夹________的情况下，一次性缓慢倒入色谱柱内，可轻轻地敲动色谱柱，使凝胶装填均匀。

（4）图是样品的加入与洗脱示意图，从图中可以看出，正确的加样操作是用吸管小心将透析后的样品________________________加样，正确的操作次序是________________________。

【答案】粗分离纯化纯度鉴定血红蛋白的释放分离血红蛋白溶液透析无法除去血浆蛋白过高过长打开贴着管壁 ③①④②

【解析】

血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：
（1）样品处理：①红细胞的洗涤（低速短时间离心），②血红蛋白的释放（需要加入蒸馏水和甲苯），③分离血红蛋白（中速长时间离心）．
（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析．
（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质．
（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳．

（1）血红蛋白提取和分离步骤：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定．

（2）样品处理又包括红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液和透析四步．洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化，如果红细胞洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白，离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果．

（3）凝胶色谱柱的装填:装填前，凝胶用蒸馏水或洗脱液充分溶胀，配成凝胶悬浮液。然后在与色谱柱下端连接的尼龙管螺旋夹打开的情况下，将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内。装填时，要均匀，不留气泡，如果发现气泡，必须重装。装填完后，用300 mL 20 mmol/L的磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶12小时，使其装填紧密。

（4）从图中可以看出，正确的加样操作是用吸管小心将透析后的样品贴着管壁加样，正确的加样顺序可依据样品在色谱柱及凝胶层中的渗入量进行分析，即调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质，可以得出正确的操作次序③①④②．

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