[题目]径柳匙叶草是一种泌盐植物.科研工作者将径柳匙叶草液泡膜Na+/K+逆向转运蛋白基因(TaNHX2基因)转移到棉花细胞内.获得了转基因耐盐棉花新品种.图1是获取的含有目的基因的DNA片段.Sau3A I.EcoR I.BamH I为三种限制酶.图中箭头所指为三种限制酶的切点,图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图,图3是土壤农杆菌中用于携带目� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】径柳匙叶草是一种泌盐植物。科研工作者将径柳匙叶草液泡膜Na＋/K＋逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得了转基因耐盐棉花新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片段，Sau3A I、EcoR I、BamH I为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。请分析回答问题：

（1）若图1所示DNA片段是利用径柳匙叶草的DNA直接获得的，则该获取目的基因的方法为_________。

（2）不能在径柳匙叶草根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA，其原因是_________。

（3）若用BamH I切割图1所示的DNA片段，获得目的基因，则需选用_________切割图3所示质粒，以便构建基因表达载体，该方案的缺陷是_________。故切割图1所示DNA片段的最佳方案是选用_________酶。

（4）用上述最佳方案构建基因表达载体，所得重组质粒_________（选填“能”“不能”或“不一定能”）被BamHⅠ切割。

（5）图3中，质粒上的抗生素抗性基因的作用是_________。

（6）为了检测技术成果，科研工作者在个体水平的检测方法是_________。

【答案】从基因文库中获取基因的选择性表达（径柳匙叶草根尖分生区细胞中TaNHX2基因不能表达） Sau3A I 出现目的基因和质粒的自我环化、目的基因在质粒上的连接方向不确定 EcoRI和BamH I 不一定能以便筛选出含有目的基因的受体细胞将转基因棉花种植在盐碱地，观察其生长状况

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）利用径柳匙叶草的DNA直接获得目的基因的方法为从基因文库中获取目的基因。

（2）径柳匙叶草根尖通过成熟区细胞吸收水分和矿质元素，细胞中TaNHX2基因表达,而分生区细胞中TaNHX2基因不能表达。

（3）依据图示限制酶识别和切割位点，用BamH I切取目的基因，不能选EcoR I切割载体，因为EcoR I切割产生的粘性末端和目的基因粘性末端碱基序列不相同。选用Sau3A I切割相应质粒，会产生相同的粘性末端，以便构建基因表达载体，该方案的缺陷是出现目的基因和质粒的自我环化、目的基因在质粒上的连接方向不确定。为克服上述弊端，可选用EcoRI和BamH I切割质粒。

（4）选用EcoRI和BamH I切割质粒，构建基因表达载体后所得重组质粒上不一定有BamHⅠ酶切位点，不一定能被BamH Ⅰ切割。

（5）基因工程中抗生素抗性基因常用作标记基因，以便筛选出含有目的基因的受体细胞。

（6）结合目的基因的功能，人们通过将转基因棉花种植在盐碱地，观察其生长状况在个体水平检测目的基因是否成功表达。

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