如图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的有关资料．图中质粒表示基因工程中经常选用的载体--pBR322质粒.Amp表示青霉素抗性基因.Tet表示四环素抗性基因．根据如图回答下列问题(限制酶Pst.1.EcoR1和HindⅢ切割形成的末端均不相同),(1)过程②需要酶.得到的cDNA一般比从基因组文库中获得的目的基因要小的多.原因是．过� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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如图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的有关资料．图中质粒表示基因工程中经常选用的载体--pBR322质粒，Amp表示青霉素抗性基因，Tet表示四环素抗性基因．根据如图回答下列问题（限制酶Pst，1、EcoR1和HindⅢ切割形成的末端均不相同）；

（1）过程②需要

酶，得到的cDNA一般比从基因组文库中获得的目的基因要小的多，原因是

．过程④需要

酶，过程⑤中要提高成功率，常用

处理大肠杆菌．
（2）如果用限制酶Pst、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒-pBR322进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共

种．
（3）基因表达载体除了目的基因和抗性基因外，至少还有

等（至少答两个）．
（4）如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322，完成过程④⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌（不含Amp′、Tet′抗性质粒）先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示．接种到甲培养基上的目的是筛选

的大肠杆菌，含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态是

、

，也可以用

方法进行检测．
（5）酵母菌细胞也常常作为基因工程的受体细胞，与大肠杆菌等细胞相比，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行

并分泌到细胞外，便于提取．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：根据图示可知，含有重组质粒的大肠杆菌能在四环素培养基中生存，但不能在青霉素培养基中生存，可知切割质粒时应选用的酶是限制酶PstI，破坏了青霉素抗性基因．甲、丙培养基中含有四环素，因此能在甲和丙中生长的大肠杆菌含有四环素抗性基因，包括导入普通质粒和重组质粒的大肠杆菌；乙培养基中含有四环素和青霉素，因此能在乙中生长的是导入普通质粒的大肠杆菌．与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌成功导入了重组质粒．

解答： 解：（1）过程②是mRNa合成DNA过程，为逆转录过程，需要逆转录酶．逆转录获得的cDNA 中没有内含子，将目的基因与运载体连接需要DNA连接酶．将目的基因导入微生物细胞，常用CaCl₂ 处理，使之成为感受态细胞．
（2）PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ分3种酶分别用1，2，3表示，一种酶酶切时，一共可以得到3种不同长片段；两种酶酶切时，可得到1-2，2-1，2-3，3-2，1-3，3-1六种片段；三种酶酶切，可得到1-2，2-3，3-1三种片段，与前面重复，因此一种可形成9种片段．
（3）基因表达载体包括目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点．
（4）在甲中能生长的是具有四环素抗性的细菌，含有四环素抗性基因；与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌成功导入了重组质粒，而且目的基因插入质粒后，破坏了青霉素抗性基因，使含有目的基因的大肠杆菌不能在含有青霉素的乙培养基上生长，但四环素基因是完好的，则含有目的基因的大肠杆菌能在含有四环素的丙培养基上生长．目的基因的检测也可用DNA分子杂交法．
（5）酵母菌为真核生物，细胞内具有对分泌蛋白加工的内质网和高尔基体等细胞器，细菌等原核生物，不具有内质网和高尔基体等细胞器．
故答案为：
（1）（逆）反转录不含内含子 DNA连接 Ca²⁺（或CaCl₂溶液）
（2）9
（3）启动子、复制原点、终止子等
（4）含四环素抗性基因在乙中不能存活在丙中存活 DNA分子杂交
（5）加工（或修饰）

点评：本题考查了基因工程应用的关知识，考查了学生对相关知识的理解和掌握情况，对图的分析判断能力．

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