Question

【题目】(一）请回答利用枯草杆菌生产α-淀粉酶及酶固定化实验的有关问题：

（1）筛选高表达菌株的最简便方法之一是：___________。 一般通过_______两种手段实现。筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用_________培养基进行扩大培养。

（2）利用物理或化学的方法将 α-淀粉酶固定在_______的介质上成为固定化酶。

（3）实验过程中涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作， 所用的蒸馏水体积为装填体积的________，第二次洗涤的目的是除去________。

（4）从反应柱下端接取少量流出液进行 KI-I2 颜色测试，结果未呈现红色。下列有关此现象 的解释错误的是：________。

A.反应柱中没有α-淀粉酶被固定

B.流速过快淀粉未被水解

C.接取的流出液是蒸馏水

D.流速过慢淀粉被水解成葡萄糖

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIF-Ⅱ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIF-Ⅱ 基因的高绒质绒山羊的简单流程如图：

（1）转基因过程用到的工具酶有______和________。

（2）在过程②中，用_______处理将皮肤租住分散成单个成纤维细胞。由于人们对动 物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的_________，在培养过程中，应将培养瓶置于________中培养。

（3）若要获得多只相同的转基因山羊， 可对图中早期胚胎进行______后进行胚胎移植。

（4）下列有关基因工程的叙述，正确的是_______________。

A.切割目的基因和载体DNA 时为获得相同的粘性末端，必须用相同的核酸内切酶

B.基因工程的原理是基因重组，其核心是上图中的过程④

C.图示过程获得的转基因绒山羊并不是克隆动物

D.重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点

Answer 1

【答案】 单菌落分离 划线分离和（稀释）涂布分离 液体 非水溶性 10倍 残留的淀粉溶液 D 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 胰蛋白酶 动物血清 CO2培养箱 胚胎分割 D

【解析】试题分析：根据题意和图示分析可知：图示表示获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程图，其中①表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶和DNA连接酶；②表示动物细胞培养过程，该过程需要采用胰蛋白酶处理组织块以获得单个细胞；③表示卵母细胞的采集和培养过程；④表示核移植过程。

（一）（1）筛选高表达菌株的最简便方法之一是单菌落分离，一般通过划线分离和（稀释）涂布分离液体两种手段实现，筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用培养基进行扩大培养。

（2）固定化酶就是利用物理或化学的方法将α‐淀粉酶固定在非水溶性的介质上。

（3）实验过程涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作，所用的蒸馏水体积为装填体积的10倍，第二次洗涤的目的是除去残留的淀粉溶液。

（4）反应柱中没有α-淀粉酶被固定，则淀粉不会被水解，导致KI-I2 颜色测试，结果未呈现红色，A正确；流速过快淀粉未被水解，会导致结果未呈现红色，B正确；接取的流出液是蒸馏水，则结果未呈现红色，C正确；淀粉溶液经过α‐淀粉酶后的水解产物是糊精，不是葡萄糖，D错误。

（二）（1）转基因过程中，获取外源基因需要用限制性核酸内切酶对含有该基因的DNA片段进行切割，再利用DNA连接酶将目的基因了解到运载体上形成重组DNA。

（2）②表示动物细胞培养过程，该过程中常用胰蛋白（或胶原蛋白）酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养细胞时需在培养基中加入一定量的动物血清，以补充合成培养基不含有的成分；在培养过程中应将培养瓶置于CO2培养箱培养，以维持PH的稳定。

（3）要获得多只相同的转基因山羊，可对图中早期胚胎进行胚胎分割后进行胚胎移植。

（4）不同的限制酶也可以露出相同的黏性末端，A错误；过程①表示构建基因表达载体，是基因工程的核心步骤，B错误；图示过程获得的转基因绒山羊是克隆动物，C错误；重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点，可以催化转录的进行，D正确。