Question

【题目】石油污染土壤的微生物修复技术得到广泛研究和应用。回答相关问题：

（1）采用向多孔结构的污染土壤中通入空气可有效的促进石油的分解，原因是_____________________。石油主要含有碳和氢属于____________，还需加入适量____________进而加快石油污染物的降解。

（2）如图是纯化分解石油的单一假单胞菌的一种方法。该培养基在灭菌前需要____________，进行倒平板的操作时对环境的要求是________________________。

（3）图中依次进行四区划线，四区的面积要求为C＜D＜E＜F，F区面积最大有利于获得____________。注意F区划线不要与________________________（填字母）区相连。

（4）如果需要对微生物进行计数则需要用稀释涂布平板法。稀释样品液至一定范围的目的是____________；这种方法统计的明显不足之处是____________。

Answer 1

【答案】 土壤中含有许多分解石油的微生物，这些微生物是需氧生物（或进行有氧呼吸） 碳源 氮源和无机盐 调节pH 在酒精灯火焰旁进行操作 单个菌落 C（或C、D） 保证获得菌落数为30－300之间，适于平板计数 菌落数比实际活菌数少

【解析】培养基一般含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、生长因子以及氧气的要求，石油主要含有碳和氢，相当于碳源。制备培养基的步骤是：计算→称量→溶化→调节pH→分装→灭菌→倒平板，为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。平板划线操作时要求每次划线都从上次划线末端开始，且每次划线前都要对接种环灼烧灭菌，最后一次划的线不能与第一次划的线相交。稀释涂布平板法在实际操作中通常选用一定稀释范围的样液进行培养，对菌落数为30-300的平板进行计数，由于两个或多个细菌细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落，因此采用稀释涂布平板法计数的结果偏小。

（1）向多孔结构的污染土壤中通入空气，可促进微生物的有氧呼吸；石油主要含有碳和氢，相当于培养基中的碳源，此外，为了促进微生物的生长繁殖，加快石油污染物的降解，还需加入适量氮源和无机盐。

（2）培养基在灭菌前需要调节pH，进行倒平板的操作时应在酒精灯火焰附近进行，避免周围环境中微生物的污染。

（3）最后划线的F区域最易获得单菌落，且要求F区划线不能与C区重合。

（4）稀释涂布平板法统计时只计数菌落数为30-300的平板，因此需要将样液稀释到一定范围；两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只有一个菌落，因此，稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。