绿色荧光蛋白基因(GFP)被发现以来.一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白质位置的理想标记．请根据图表回答下列问题．(1)若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是-TCGA-.N端伸出的核苷酸的碱基序列是-TGCA-.则在构建含该GFP的重组质粒A时.应选用限制酶和 .再对进行切割．(2)若对符合设计要求的重组质粒A进行酶切.假设所用的酶� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白质位置的理想标记．请根据图表回答下列问题．

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是-TCGA-，N端伸出的核苷酸的碱基序列是-TGCA-，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶

和

，再对

进行切割．
（2）若对符合设计要求的重组质粒A进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图表中的信息分析，若采用BamHⅠ和PstⅠ酶切，可得到

种DNA片段．
（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可在荧光显微镜下观察GFP的表达，图中绿色荧光蛋白转基因克隆猪的转基因操作中的GFP既是

，也是

．
（4）过程④将重组质粒A导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是

．
（5）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中涉及到多项现代生物技术，图中⑤⑥⑦过程属于

．⑧过程属于

，在使用合成培养基时，通常加入

等一些天然成分．
（6）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：

（用数字序号表示）．
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸；
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列；
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）；
④表达出蓝色荧光蛋白．

考点：基因工程的原理及技术,动物细胞与组织培养过程

专题：

分析：据图分析，①表示获取目的基因，②表示用限制酶切割质粒，③表示基因表达载体的构建，④表示将目的基因导入受体细胞，⑤表示将猪胎儿成纤维细胞提取细胞核，⑥表示将猪卵母细胞去除细胞核，⑦表示核移植，⑧表示动物细胞培养，⑨表示胚胎移植．

解答： 解：（1）从图示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位点；N端伸出的核苷酸的碱基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位点；则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶把目的基因和运载体相连．
（2）PstI可将重组质粒的N端切开，而BamHⅠ能在重组质粒的黑色部分切开，这样就得到2种DNA．
（3）据图解，可知最终要得到绿色荧光猪，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成绿色荧光蛋白，可据此检测GFP是否成功导入细胞，作为标记基因．
（4）将重组质粒A导入猪胎儿成纤维细胞时，采用显微注射法．
（5）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，图中⑤⑥⑦过程属于核移植技术．．⑧过程属于动物细胞培养，在使用合成培养基时，通常加入血清、血浆等一些天然成分．
（6）蛋白质工程的基本途径是：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构（②）→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列（①）→相应基因的修饰改造或人工合成（③）→相应的表达（④）．
故答案为：
（1）HindⅢPstⅠTi质粒
（2）2
（3）目的基因   标记基因
（4）显微注射技术
（5）核移植   动物细胞培养   血清、血浆
（6）②①③④

点评：本题考查基因工程、蛋白质工程、动物细胞培养等的相关知识，意在考查学生识图和理解能力，属于中档题．

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