Question

【题目】不同品牌的酸奶具有不同的口味。某研究小组利用含碳酸钙的固体培养基探究甲，乙两品牌酸奶中乳酸菌的类型是否相同(乳酸能够溶解碳酸钙，使培养基变得透明)。请回答下列问题:

（1）将甲、乙两品牌酸奶中的乳酸菌纯化，分别接种在含碳酸钙的固体培养基中培养，根据菌落周围透明圈的大小，可确定酸奶中乳酸菌的类型。不同乳酸菌菌落透明圈大小不同的原因是_________________________________________________________

（2）家庭制作酸奶时，在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物培养技术中的________操作。 纯牛奶变成酸奶，改变了口味但含有的能量减少，原因是____________________________。

（3）为长期保存纯化的优质乳酸菌，可将菌液与________充分混匀，置于20C的冷冻箱中保存。

（4）该研究小组进一步探究甲 品牌酸奶中乳酸菌数量，实验操作如下图。接种微生物的方法有很多，图中过程①②③所示的方法为_____________用该方法统计样本菌落数后，所得数据需要乘以10后，才可表示乳酸菌的数量(单位:个/ml), 这里的n=______用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个平板，目的是________________________如果平板菌落数超过300，一般还需进一步_____

Answer 1

【答案】（在相同时间内）不同类型的乳酸菌产生乳酸的量不同，不同量的乳酸能够溶解碳酸钙量不同，形成的透明圈大小不同 接种 乳酸菌在发酵时使牛奶中的营养成分发生改变，乳酸菌细胞呼吸消耗部分有机物，从而使能量减少 灭菌的甘油 稀释涂布平板法 6 设置重复组，取平均值，使实验结果更加准确可靠 稀释

【解析】

本题以乳酸菌为背景，综合考查了微生物的分离和计数的相关知识。

（1）由于乳酸菌分泌的乳酸能够溶解碳酸钙，使培养基变得透明，不同类型的乳酸菌分泌乳酸的量不同，分泌量多的产生的透明圈较大，而分泌量少的产生的透明圈则较小。因此可以根据菌落周围透明圈的大小，确定酸奶中乳酸菌的类型。

（2）由于酸奶中含有乳酸菌，因此在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物培养技术中的接种操作。纯牛奶变成酸奶是由于乳酸菌发酵的结果，乳酸菌在发酵过程中利用牛奶中的营养物质进行代谢，通过细胞呼吸消耗了牛奶中的部分有机物，因此酸奶比纯牛奶中的能量减少了，在乳酸菌代谢过程中又有新物质的生成，从而使牛奶中的口味发生了改变。

（3）微生物菌种的保藏有临时保藏和长期保藏之分，临时保藏是把菌种接种到试管的固体培养基上，在合适的温度下培养，当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20℃的冷冻箱中保存。

（4）要对微生物计数可以采用活菌计数法或显微镜直接计数法，题目所给的图片信息是采用的活菌计数法，具体操作是通过稀释涂布平板法完成的。由①②的操作可知这时已对酸奶样品稀释了100倍，②重复3次又稀释了1000倍，从中取出0.1ml样进行涂布，所用到的量是原来的10－6。因此这里的n=6。用稀释涂布平板法计数时，要至少涂布3个平板，目的是设置重复组，取平均值，使实验结果更加准确可靠。为了保证结果准确，一般选择菌落数中30~300的平板进行计数，如果平板菌落数超过300，说明稀释倍数不够，一般还需进一步稀释。