Question

【题目】下图1为某种常用质粒的序列图，LacZ基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Ampr为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

（1）基因工程的核心步骤是______________。

（2）实验小组用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割目的基因和质粒，若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有__________和________。

（3）成功导入重组质粒的大肠杆菌菌落显_______，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_______(填“能”或“不能）在该培养基上生存。

（4）将若干个质粒和目的基因用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamHⅠ和EcoRⅠ切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段，则目的基因的长度为______kb(已知目的基因的长度大于1kb，1kb=1000个碱基对）。

Answer 1

【答案】 构建基因表达载体 X—gal 氨苄青霉素 白色 没有目的基因的空质粒 不能 1.8

【解析】（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建

（2）用BamHⅠ和BlgⅡ两种限制酶切割目的基因和质粒，则LacZ基因被破坏，培养基中应加入X—gal和氨苄青霉素

（3）因LacZ基因被破坏，故成功导入重组质粒的大肠杆菌菌落显白色，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入没有目的基因的空质粒，没有导入任何外源DNA的大肠杆菌，无氨苄青霉素抗性基因，不能在该培养基上生存。

（4）根据BamHⅠ和BlgⅡ两种酶识别的序列为G↓GATCC、A↓GATCT．质粒上存在BamHI的切割位点，假设用a和b表示．目的基因上存在BamHⅠ和BlgⅡ两种酶的酶切位点，假设分别用c和d表示。那么目的基因与质粒链接的方式可能有两种，如图所示：

用BamHⅠ切割和EcoRⅠ切割成功连接后的产物，获得了长度为0.7kb、2.8kb、1kb和2.5kb四种长度的DNA片段。

①如果BamHⅠ切割ac处，可能的情况如图：

②如果BamHⅠ切割ac处，可能的情况如图，

据图比较可推断出目的基因的长度为1.8Kb。