Question

【题目】根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有____________和____________。

（2）质粒运载体用EcoR I切割后产生的片段如图：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR I切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是____________。

（3）根据来源的不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即______DNA连接酶和______DNA连接酶。

（4）基因工程中除质粒外，________和_______也可作为运载体。

（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是________________。

Answer 1

【答案】平末端 ）黏性末端 切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同 T4 E·coli 动植物病毒 噬菌体的衍生物 未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱

【解析】

基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体；限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种；DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶；基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。

（1）限制性核酸内切酶（简称限制酶）切割DNA分子后，产生的片段末端类型有黏性末端和平末端；

（2）目的基因与运载体具有相同的黏性末端才能连接，若用包括EcoRⅠ在内的两种限制酶切割目的基因，则另一种限制酶必须具有的特点是：切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同；

（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即E·coli DNA连接酶（来源于大肠杆菌）和T4 DNA连接酶（来源于T4 D噬菌体）；

（4）基因工程中常用的运载体是质粒，此外还有噬菌体的衍生物和动植物病毒；

（5）由于未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱，因此若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，而通常用Ca2+处理大肠杆菌细胞，使其成为感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒。