Question

【题目】重组人血小板生成素(rhTP0)是一种新发现的造血生长因子，如图为通过乳腺生物发生器产生rhTP0的相关过程。回答下列问题：

（1）构建重组质粒时选用的限制酶是__________，原因是_________。重组质粒中的标记基因是________，标记基因的作用是____________。

（2）图中所示的过程与胚胎工程相关的有_____________(至少写出两个)。

（3）若检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，检测方法是___________技术，其次还需检测目的基因____________，这是检测目的基因是否发挥作用的第一步，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。

Answer 1

【答案】HindⅢ和XhoⅠSmaⅠ的酶切位点位于目的基因中间，如果用SmaⅠ切割，不能得到完整的目的基因(或用HindⅢ和XhoⅠ可以得到完整的目的基因)抗卡那霉素基因鉴别受体细胞中是否含有目的基因，以便筛选体外受精、早期胚胎培养(动物细胞培养)、胚胎移植DNA分子杂交是否转录出mRNA

【解析】

据图分析，图中目的基因上存在三个限制酶切割位点，由于SmaⅠ的酶切位点位于目的基因中间，利用该限制酶会破坏目的基因，因此应选用HindⅢ和XhoⅠ两种限制酶切割目的基因，而利用这两种限制酶切割质粒会破坏质粒上的抗四环素基因，则质粒上应选用抗卡那霉素基因作为标记基因。

（1）根据以上分析已知，图中SmaⅠ酶切位点位于目的基因中间，如果用SmaⅠ切割，不能得到完整的目的基因，因此应选用HindⅢ和XhoⅠ两种限制酶切割目的基因。标记基因用于鉴别受体细胞中是否含有目的基因，以便筛选；由于利用这两种限制酶切割质粒会破坏质粒上的抗四环素基因，则质粒上应选用抗卡那霉素基因作为标记基因。

（2）图中受精卵的获得首先需要进行体外受精，再通过早期胚胎培养获得桑椹胚或囊胚，最后再利用胚胎移植技术移植到母羊子宫中。

（3）检测目的基因是否插入了受体细胞的DNA上，一般采用DNA分子杂交法；基因发挥作用的第一步是转录，产生的mRNA可以用分子杂交法进行检测。