[题目]苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白.下图是转Bt毒素蛋白基因(A基因)植物的培育过程示意图据图回答下列问题.(1)可利用技术获得并扩增A基因.如果开始的A基因只有一个.第n次循环需要引物对.引物的设计依据是 .(2)若选用双酶切构建重组质粒.可选择限制酶对目的基因片段进行切割.选择对质粒进行切割.(3)目的基因� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因（A基因）植物的培育过程示意图据图回答下列问题。

（1）可利用_____________技术获得并扩增A基因。如果开始的A基因只有一个，第n次循环需要引物_____________对，引物的设计依据是___________________________。

（2）若选用双酶切构建重组质粒，可选择限制酶_______________对目的基因片段进行切割，选择对_________________质粒进行切割。

（3）目的基因插入质粒后，不能影响质粒的________________，重组大肠杆菌可通过涂布有氨苄青霉素的培养基筛选出是因为__________________。

（4）③过程中目的基因A需插入Ti质粒的_______________中，原因是_______________。

（5）生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是______________。

【答案】PCR 2n-1 目的基因两侧的核苷酸序列 EcoRI和BglII EcoRI和BamHI 复制（重组）质粒中（转化成功的大肠杆菌）含有氨苄青霉素抗性基因，未转化的大肠杆菌不含有该基因 T-DNA T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上降低害虫种群中的抗性基因频率的增长速度

【解析】

分析题图：图示表示转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程，其中②表示基因表达载体的构建过程；③表示采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞的过程；④表示目的基因的表达。

（1）扩增目的基因可采用PCR技术。扩增（n-1）次一共有2n-1个DNA分子，共有模板链2n-1×2条，因此第n次循环也需要引物2n-1×2条，共2n-1对，引物的设计是根据目的基因两侧的核苷酸序列进行设计。

（2）若选用双酶切构建重组质粒，避免目的基因和质粒的自身环化，也避免目的基因和质粒反向链接，则如图所示，可采用限制酶EcoRI和BglII切割目的基因，选择EcoRI和BamHI对质粒进行切割。

（3）质粒要能进行复制才能得到更多的表达产物，所以构建基因表达载体后，不能影响质粒的复制。由于（重组）质粒中（转化成功的大肠杆菌）含有氨苄青霉素抗性基因，未转化的大肠杆菌不含有该基因，故可用涂布有氨苄青霉素的培养基筛选出重组大肠杆菌。

（4）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，③过程中目的基因A需插入Ti质粒的T-DNA，因为T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。

（5）转基因与非转基因作物混种，可降低抗性作物对害虫的选择性，使害虫种群中的抗性基因频率增长率减慢。

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科目：高中生物 来源： 题型：

【题目】肿瘤血管生长是肿瘤生长的关键环节，血管内皮生长因子（VEGF）是一种参与促进肿瘤血管生长的蛋白质，VEGF作为治疗癌症的靶分子受到了很多研究者的关注。

（1）VEGF 的受体存在于血管内皮细胞的_____，可促进血管内皮细胞的_______，形成的细胞最终构成新的血管。

（2）研究者利用噬菌体文库筛选能与VEGF特异性结合的多肽。过程如下。

①将人工合成的编码随机六肽的基因插入噬菌体DNA，形成重组DNA分子，用重组DNA分子转化大肠杆菌，大肠杆菌经培养后裂解，产生噬菌体。这些噬菌体构成一个文库，一个包含所有可能六肽的噬菌体文库至少有____种噬菌体组成，在这些噬菌体中可能有某种六肽能与VEGF特异性结合（图一）。

②将VEGF能够与受体结合的部位固定在微孔容器底部，在微孔中加入随机肽文库，一段时间后用缓冲液洗去不能与VEGF结合的噬菌体，然后用含有_____的缓冲液将结合在微孔底部的噬菌体洗脱下来，这种分子能够与微孔容器底部的分子竞争性结合噬菌体，这说明噬菌体与目标分子的结合是_____（可逆或不可逆）的。

③将洗脱下来的噬菌体转入另一试管，加入_____，经过一段时间振荡培养，产生新一代噬菌体库。

④重复步骤②③多次。

（3）在多轮实验后产生的噬菌体文库比第一代噬菌体文库与VEGF的结合能力更强，文库中噬菌体的种类_____，请分析原因：_____。

（4）欲证明筛选到的多肽X能够起到抑制肿瘤生长的作用，研究者设计了这样的实验：将多肽X溶液注射到只肿瘤模型小鼠体内，（肿瘤型鼠是天然条件下就会产生肿瘤的小鼠品系），检测VEGF与VEGF受体的结合能力。请对该实验做出评价并加以完善___________________________________。测VEGF与VEGF受体的结合能力。请对该实验做出评价并加以完善___________________________________。