Question

【题目】回答下列有关转基因技术问题：利用转基因技术将绿色荧光蛋白基因（G）整合到斑马鱼 17 号染色体上，带有 G 基因的 胚胎能够发出绿色荧光。图1和图2所示分别为实验所用的质粒上相关酶切位点以及含绿 色荧光蛋白基因（G）的外源 DNA 片段上具有的相关酶切位点。

（1）基于上述信息，该基因工程的目的基因是_____。

（2）用图1中的质粒和图2外源 DNA 构建重组质粒，不能使用_____切割，原因 是_____。如果要防止质粒和含目的基因的外源 DNA 片段自身环化，则应选择下列方法_____（填编号）为好。

①只使用 EcoR I 处理 ②使用 BamH I 和 Sma I 同时处理

③使用 BamH I 和 Hind III ④使用 Sma I 和 Hind III 同时处理

（3）若将图1所示质粒转入大肠杆菌内，为筛选含有该种质粒的大肠杆菌细胞，除了在培养基中添加营养物质外，还应添加_____。

（4）如果要胚胎发出绿色荧光，则应将重组质粒导入到斑马鱼的_____细胞中培养，筛选。如果要让行道树发出绿色荧光，则可以将重组质粒导入行道树的_____细胞中。

A、根 B、茎 C、叶 D、芽

由此看出动植物基因工程的受体细胞有所不同，请你分析选择不同受体细胞的原因：_____。

Answer 1

【答案】绿色荧光蛋白基因/G 基因 Sma I Sma I 限制酶会破坏目的基因和质粒中的抗性基因/标记基因 ③ 氨苄青霉素 受精卵 ABCD 动物受精卵具有全能性，植物细胞一般都具有全能性，使目的基因有效表达

【解析】

分析图1和图2：质粒和含有目的基因的外源DNA分子中都含有4种限制酶的切割位点，但其中限制酶SmaⅠ的切割位点位于目的基因和质粒的抗性基因上，用其切割会破坏目的基因和抗性基因。

（1）基于上述信息，该基因工程的目的基因是绿色荧光蛋白基因（G基因）。

（2）由于目的基因和质粒的抗性基因上都含有限制酶SmaⅠ的切割位点，用SmaⅠ切割会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因，因此用图1中的质粒和图2外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割。用限制酶BamHI和HindⅢ同时处理，既可防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，也可以防止目的基因和质粒反向连接。即③符合题意。

（3）由图可知，标记基因是氨苄青霉素抗性基因，因此为筛选含有该种质粒的大肠杆菌细胞，除了在培养基中添加营养物质外，还应添加氨苄青霉素。

（4）培育转基因动物时，应该以受精卵作为受体细胞；由于植物细胞具有全能性，因此如果要让行道树发出绿色荧光，则可以将重组质粒导入行道树的各种体细胞中。即ABCD符合题意。动植物基因工程中选择不同受体细胞的原因：动物受精卵具有全能性，植物细胞一般都具有全能性，使目的基因有效表达。